猪传染性胃肠炎病毒感染诱导肠上皮细胞线粒体自噬的研究的任务书.docx

猪传染性胃肠炎病毒感染诱导肠上皮细胞线粒体自噬的研究的任务书
题目：猪传染性胃肠炎病毒感染诱导肠上皮细胞线粒体自噬的研究
一、绪论
猪传染性胃肠炎病毒（PorcineEpidemicDiarrheaVirus，PEDV）是一种引起猪肠道疾病的冠状病毒，具有高度传染性和致死率。自2010年在美国的出现以来，由于其强烈破坏力和迅速传播性，已成为全球猪养殖业的严重威胁。线粒体是维持生命的重要细胞器，其功能障碍会引起多种疾病。近年来，越来越多的研究表明，病毒感染可诱导宿主细胞线粒体的自噬，进一步影响细胞的代谢和生存功能，但关于PEDV感染诱导肠上皮细胞线粒体自噬的机制尚不清楚。因此，本研究将探索PEDV感染对肠上皮细胞线粒体自噬的影响，并深入探讨其发生机制。
二、研究内容
1.构建PEDV感染模型
利用活体培养技术建立PEDV感染的肠上皮细胞体外模型，并观察PEDV感染对肠上皮细胞的影响。
2.鉴定自噬活性
采用光学显微镜和电子显微镜技术观察PEDV感染下肠上皮细胞的自噬形态，同时通过Westernblot检测LC3、Beclin1和p62等关键蛋白的表达，鉴定自噬活性。
3.检测线粒体的形态变化和功能变化
利用活体显微镜和电子显微镜技术观察PEDV感染下线粒体形态的变化，并通过测定ATP水平、线粒体膜电位和ROS产生水平变化等指标，分析PEDV感染对线粒体功能的影响。
4.探究PEDV感染诱导肠上皮细胞线粒体自噬的机制
通过Westernblot和RT-PCR等方法，分析PEDV感染下自噬相关信号通路的变化，如mTORC1信号通路、AMPK信号通路、Beclin1-Vps34信号通路等，探究PEDV感染诱导肠上皮细胞线粒体自噬的机制。
三、研究意义
本研究通过探究PEDV感染下肠上皮细胞自噬过程的变化，深入探讨PEDV感染对线粒体形态和功能的影响，进一步揭示PEDV感染肠道细胞的感染机制，为防治PEDV感染提供理论支持。
四、研究方法
1.细胞培养和病毒感染
选取常规的肠上皮细胞系如Caco-2、HT-29等，进行细胞培养和病毒感染。
2.光学显微镜和电子显微镜技术
对PEDV感染模型下的肠上皮细胞进行光学显微镜和电子显微镜观察。
3.Westernblot和RT-PCR技术
采用Westernblot分析自噬相关蛋白的表达，如LC3、Beclin1和p62等，同时通过RT-PCR技术检测自噬相关信号通路的变化。
4.ATP水平、线粒体膜电位和ROS产生水平变化的检测
肠上皮细胞被PEDV感染后，利用ATP检测试剂盒、Rhodamine123荧光探针和DCFH-DA荧光探针对PEDV感染下线粒体的功能变化进行检测。
五、预期成果及其应用前景
本研究可深入揭示PEDV感染对肠上皮细胞自噬和线粒体的影响，从分子水平探究PEDV感染的发病机制，为PEDV感染的临床防治提供理论依据。同时，对于其他病毒感染下自噬和线粒体的变化也具有有益的参考价值。