牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备与双抗夹心ELISA方法的建立的任务书.docx

牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备与双抗夹心ELISA方法的建立的任务书
任务书
一、任务来源
牛病毒性腹泻病毒是一种由牛病毒性腹泻病毒引起的疾病，在全球范围内都有发生。目前，对于该病毒的防治还没有十分有效的方法，因此需要研发一种有效快速的检测方法。单克隆抗体和双抗夹心ELISA法是目前检测牛病毒性腹泻病毒最常用的方法之一，本次任务的目的就是研制出牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体和双抗夹心ELISA方法。
二、任务描述
1.牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备
研究人员需要收集牛病毒性腹泻病毒和制备成病毒抗原，从免疫小鼠中制备单克隆抗体。具体步骤如下：
（1）收集牛病毒性腹泻病毒并制备成病毒抗原
研究人员需要收集牛病毒性腹泻病毒，并在实验室中将其制备成病毒抗原用于免疫小鼠。
（2）小鼠免疫及淋巴细胞融合
将准备好的病毒抗原注射到小鼠体内进行免疫，免疫富集足够多的抗体产生的淋巴细胞，并进行细胞融合，形成杂交瘤。
（3）筛选和克隆单克隆抗体
使用限制性酶切中和亚类和ELISA方法挑选出对牛病毒性腹泻病毒具有较高效价的细胞克隆，并进行单克隆抗体的克隆及扩增。
2.双抗夹心ELISA方法的建立
在牛血清中检测牛病毒性腹泻病毒，采用单克隆抗体和多克隆抗体的双抗夹心ELISA法进行检测。具体步骤如下：
（1）制备牛病毒性腹泻病毒感染的抗原
在实验室中将牛病毒性腹泻病毒培养、复制，并制备成感染血清。
（2）准备单克隆抗体和多克隆抗体
将制备好的单克隆抗体和多克隆抗体分别检测其效价，根据结果确定最终使用的抗体浓度。
（3）比色反应和测定抗体滴度
将制备好的抗原及其对应的一抗和二抗加入到96孔板中，加入酵素底物后，利用ELISA读板机进行检测，根据读数计算出样品中的牛病毒性腹泻病毒抗体滴度。
三、任务计划
1.牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备
第一周：牛病毒性腹泻病毒采集及病毒抗原制备
第二周：小鼠免疫及淋巴细胞融合
第三周：细胞培养及淋巴细胞的筛选和克隆
第四周：单克隆抗体的表达及纯化
2.双抗夹心ELISA方法的建立
第一周：制备牛病毒性腹泻病毒感染的抗原
第二周：单克隆抗体和多克隆抗体的准备
第三周：比色反应和测定抗体滴度
第四周：对抗体的效价进行评价
四、任务成果
1.牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备
制备出单克隆抗体，并对其产生的效价、特异性进行检测和评价。
2.双抗夹心ELISA方法的建立
制备出双抗夹心ELISA方法，并对其灵敏度、特异性进行检测和评价。
3.写出项目总结报告，详细介绍实验方法、数据分析结果等。