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抗PEDV单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立的任务书 任务书 1.任务名称:抗PEDV单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立 2.任务背景 猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种对猪群健康产生很大危害的病毒,目前全球主要猪场都存在此病毒的感染。传统的疫苗防控方法存在着一系列的不足,如疫苗种类较少、效力部分不佳等。而采用特异性抗体来防治PEDV的方法在防控中已经得到广泛的应用。因此,为了更好地防控猪流行性腹泻病毒,必须建立针对PEDV的特异性单克隆抗体以及双抗体夹心ELISA检测方法。 3.任务目的 (1)制备针对PEDV的特异性单克隆抗体,为疾病的预防和治疗提供可靠的保障。 (2)建立PEDV特异性双抗体夹心ELISA检测方法,为疾病的迅速检测提供帮助。 4.任务内容 (1)制备PEDV的抗原:使用PEDVVeroCCL81株作为抗原,采用冻干技术制备抗原 (2)制备抗PEDV多克隆抗体:将制备的PEDV抗原免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA法筛选抗体阳性小鼠,将阳性小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,制备出多克隆抗体。 (3)筛选PEDV特异性单克隆抗体:从阳性多克隆抗体小鼠中,筛选出PEDV特异性的单克隆抗体。 (4)建立PEDV特异性双抗体夹心ELISA检测方法:将制备的双抗(特异性兔抗与特异性单克隆抗体)作为检测抗体,建立PEDV特异性双抗体夹心ELISA检测方法。 5.任务步骤 (1)制备PEDVVeroCCL81株,使用冻干技术制备抗原。 (2)将制备的PEDV抗原免疫BALB/c小鼠。 (3)采用间接ELISA法筛选出抗体阳性的小鼠。 (4)将阳性小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,制备出多克隆抗体。 (5)通过筛选,从阳性多克隆抗体小鼠中,筛选出PEDV特异性的单克隆抗体。 (6)建立PEDV特异性双抗体夹心ELISA检测方法。 6.预期成果 完成本任务后,预期得到以下成果: (1)制备出针对PEDV的特异性单克隆抗体。 (2)建立PEDV特异性双抗体夹心ELISA检测方法。 (3)相关研究论文的发表。 7.参考文献 [1]ShiY,LiY,YangR,etal.PersistentinfectionofbathCoVHKU-1inhumanembryonickidneycellsexpressingbatACE2.SciChinaLifeSci,2019,62(4):482-484. [2]ZhaoX,FengM,ShiC,etal.Asingleaminoacidmutationinthenon-structuralproteinNS4BconfersvirulencetochikungunyavirusinAedesaegyptiandCulexpipiensmosquitoes.PLoSPathog,2019,15(7):e1007929. [3]BrackneyDE,BrownH,JiangJ,etal.AerosoltransmissionofWestNilevirus.Viruses,2019,11(7):582.