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665中国卫生检验杂志2007年3月第17卷第3期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Mar2007;Vol17No3

【综述】

ELISA和GICA在食源性致病菌检测中的应用

吴清平1,王大鹏1,2,3,杨宁4,张菊梅1

(11广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室,广州510070;21中国科学院武汉病毒研究所,武汉430071;
31中国科学院研究生院,北京100049;41广东环凯微生物科技有限公司,广州510070)

[关键词]ELISA;GICA;食源性致病菌;应用
[中图分类号]R446161[文献标识码]A[文章编号]1004-8685(2007)03-0566-03

近几年,中国疾病预防控制中心营养与食品安全所对全表13种ELISA方法的优缺点比较
国部分省市的生肉、熟肉、乳和乳制品、水产品、蔬菜中的致病方法优点缺点
菌污染状况进行了连续的动态监测结果表明微生物源性食
,,间接法操作简便、省时易于推广使用非特异性反应较强
物中毒占居首位,高达39162%[1]。微生物性食品污染包括细
双夹心法特异性强、可检测多种抗原操作较繁琐
菌性污染、病毒污染和真菌及其毒素的污染等。针对不同的
竞争法特异性强、可检测小分子抗原及半抗原每种抗原都需要标记
检测对象,微生物源性食品污染的检测方法很多,如传统的细
菌分离培养法、多聚酶链式反应(PCR)、生物芯片技术和免疫
学检测技术等。随着免疫学检测技术研究的飞速发展,酶联111沙门菌的检测
免疫吸附试验(ELISA)和胶体金免疫层析技术(GICA)以其简沙门菌是常见的重要食源性致病菌之一,可以污染鲜牛
便、快速、灵敏、成本低、检测谱广等特点在食源性致病菌检测奶、熟食制品等,对其检测方法的应用研究也较多。田银芳
方面的应用也越来越受到人们的青睐。等[3]应用直接ELISA方法对350份奶样进行沙门菌的检测。
ELISA和GICA是以抗原抗体特异性反应为基础而建立与常规方法相比,该方法的敏感性和特异性分别为100%和
起来的一种检测方法。该方法利用已知抗体或抗原来检测相9917%。张艳红等[4]则利用单克隆抗体建立了一种竞争
应抗原或抗体,可以进行定性和定量检测。由于该技术具有ELISA方法,与国标法相比灵敏性、特异性分别为9414%和
高度敏感性和特异性的特点,故可用于测定样品中微量的抗9717%。杨静等[5]利用两株单抗建立的直接ELISA方法对沙
原和抗体。最常用提高检测敏感度的方法是放大免疫反应信门菌属有高度的特异性且对A-F群代表菌株的最小检出量
号,即标记抗体技术,对抗体进行酶、荧光或放射性标记。当为106cfu/L。这充分展示ELISA的特点,而且显示出与国标
前,在各种免疫诊断技术中标记抗体技术已成为发展快、应用法相比的优势。另外,还有研究者将其他分离技术与ELISA
[2]
广的一个重要领域。ELISA和GICA在食源性致病菌的检结合起来以缩短检测周期和降低检测限。MansfieldLP等[6]
测中所起的作用也越来越重要,如用于检测沙门菌(Salmonel2将免疫磁珠分离技术与ELISA联合起来建立一个检测系统。
la)、大肠杆菌O157(EscherichiacoliO157)、单核细胞增生李斯该系统对生鸡肉和饲料的检测限为2×103cfu/25g,整个检测

特菌(Listeriamonocytogenes)和黄曲霉毒素B1及M1(Aflatoxin过程耗时不足27h,其中包括18h传统的前增菌和6h葡萄

B1&AflatoxinM1,AFB&AFM)等。糖营养肉汤培养的样品预处理过程;而传统方法需要72～
96h。这对于快速检验是一个很好的尝试。
1ELISA及常见致病菌的检测112大肠杆菌O157的检测
ELISA是一种非放射性标记免疫分析技术。20世纪70大肠杆菌O157也是严重危害人类身体健康的食源性致
年代初,由Engvall及VanWeemen等在放射免疫分析(radioim2病菌,可导致人畜死亡。赵志晶等[7]研究获得了抗肠出血性
munoassay,RIA)的基础上建立起来的一种非均相的酶免疫检大肠杆菌O157:H7的多克隆抗体,建立了用于食品样品检测
测技术。ELISA的基本原理是预先结合在固相载体上的抗体的双抗ELISA检测方法。该方法对纯培养菌液检测限为103
或抗原分子与样品中的抗原或抗体分子在一定条件下进行免～104cfu/ml;只对O157菌株有特异性反应,对非O157菌株
疫学反应,免疫复合物所携带的酶分子可将特定的底物分子无交叉反应;经过增菌,鸡肉与牛奶染菌样品中的大肠杆菌
转化为具有特定颜色的化合物,并由颜色的深浅反映样品中O157的检出下限均为01