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油菜素内酯概况 油菜素内酯(Brassinolide,BL)是20世纪70年代从自然界分离鉴定的 一系列超微量内源性植物生长调节剂中的活性最强者,其广谱、高效、安全, 生物活性和生理功能与其它已发现的五类植物生长调节剂完全不同。油菜素内 酯是植物生长发育所必需的基本调节物质,普遍存在于植物体中,调控着各种 植物的生长发育过程。 1油菜素内酯的发现历程 1.1油菜素内酯的发现 早在1968年,日本名古屋大学的Marumo(丸茂晋吾)等从400kg蚊母树 (DistyliumracemosumSiebetZucc)叶片中分离提取到751ug蚊母素A1和 236ug蚊母素B,经稻叶倾斜法测试,其生物活性明显高于生长素。但在《农业 生物化学》(Agri.Biol.Chem)上发表后,并未引起注意,后来查明这种物 质是油菜素内酯类物质。一般认为油菜素内酯的研究始于197O年美国马利兰州 贝尔茨维尔(Beltsville)美国农业部(USDA)农业研究中心农学家 J.W.Mitchell和他的助手发现的。 Mitchell领导下的四人小组,自1970年开始花粉激素的研究。他们筛选 了约60种花粉,发现其中半数可促进菜豆幼苗的生长。其中以油菜和赤杨的花 粉的作用为最强。这两种花粉的提取物有一个共同的特点:用高浓度处理豆苗 时,由于生长过快,使第二节间茎裂,然后又重新长在一起。因此,可用菜豆 幼苗的第二节间的伸长试验来进行活性测定。 1.2油菜素内酯的分离纯化 Mitchell等用乙醚萃取油菜花粉的活性物质。萃取物经薄板层析,以苯- 甲醇-乙酸(45∶8∶4)为展开剂,发现在Rf0.35~0.45处有活性,取下此活性 部分,用无水乙醇萃取数次,再用乙醚提取,风干后的物质,在当时(1970年) 被命名为油菜素(Brassins)。经核磁共振谱(NMR)分析,显示有脂肪酸酯的特征 信号,表明它们具有甘油酯型的结构。从1970~1972年他们连续发表了四篇论 文。在此期间,他们把研究重点放在生理活性上,较少注意化学结构的研究。 美国学者Grove、Mandava等在《Nature》上发表了从油菜素提纯得到单一 的物质及其结构测定的论文。他们将油菜素复合物经活性硅酸镁(Florisil)柱 层析,其乙醚甲醇(1∶1)的洗脱液为主要活性组分,它在硅胶薄板上为单一 1/8 点。经仪器分析,得知该物质是由脂肪酸和葡萄糖所组成的酯类化合物。这些 酯类经菜豆的第二节间伸长试验,结果活性很低。他们估计,真正的活性物 质,其含量大概是极微量的,必须从大量的花粉中才能获得高活性的物质。经 过大量的工作,终于从227kg油菜(Brassicanapus)花粉中得到4mg的高活性 结晶物,于1979年通过X光衍射和超微量分析,测定其结构为甾醇内酯化合 物,并把油菜素改名为油菜素内酯(Brassinolide,BL)。此后,油菜素内酯及 与其结构相似的化合物在多种植物中得到分离鉴定。这些以甾醇为基本结构的 具有生物活性的天然产物统称为油菜素甾醇类物质(Brassinosteroids,BRs), 而BL是油菜素甾醇类成员中活性最强的一种分子。BRs在植物中广泛存在,迄 今发现了大约70种油菜素内酯类化合物。 1998年,在日本千叶举行的第十六届国际植物生长物质协会会议 (ConferenceoftheInternationalPlantGrowthSubstances Association,IPGSA)上,BRs被正式确认为是继生长素(IAA)、赤霉素 (GA)、细胞分裂素(CTK)、脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)之后的第六类植物激素。 1.3黄志桂教授与油菜素内酯 自1970年J.W.Mitchell发现油菜素内酯及其高生理活性后,其深受世界 各国关注,都希望应用于农业生产。但由于它在植物体内含量太低,萃取工艺 复杂,成本太高;从植物体里分离油菜素内酯,再用于农田,曾被认为是行不 通的。各国纷纷研究化学合成芸苔素,为便于区别,将J.W.Mitchell发现的化 合物称为天然芸苔素。 上世纪70年代初的中国,要想接触国外的科研资料还很难。一个偶然的机 会,原西南师范大学黄志桂教授了解到这一信息,那已经是1989年,距离美国 人首次发现油菜素已相隔19年。1989年,黄志桂教授向天然提取芸苔素的世 界难题挑战,耗费两年时间,从几百种植物中选择材料,终于摸索出“高效萃 取法”,成功研究出油菜素内酯批量生产的工艺技术,并研制出“天然芸苔素 合剂”。皇嘉天然芸苔素不仅在国内独一无二,在世界上也是独一无二,这项 成果达到国际领先水平。1993年技术定型后,重庆市土壤肥料站连续两年用它 对玉米和再生稻进行大田小区规范性试验,并同其它18种生长素作了对比,