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复制型HBV小鼠模型建立及可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠制备的任务书
任务书
题目：复制型HBV小鼠模型建立及可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠制备
一、任务目的
本任务旨在利用分子生物学和遗传学技术，建立复制型HBV小鼠模型和特异性表达uPA转基因小鼠，为进一步研究HBV感染、肝炎发生和治疗提供实验模型，为肝移植和药物代谢提供实验基础。
二、任务内容
1.复制型HBV小鼠模型的建立
根据已有文献，建立两种不同的复制型HBV小鼠模型，依次分为以下步骤：
（1）构建HBV感染小鼠模型，采用人源HBV或鼠源HBVDNA的转染或恢复性感染的方法感染小鼠，监测病毒复制和表达水平；
（2）构建HBV基因敲除小鼠模型，采用CRISPR/Cas9技术敲除小鼠体内的HBV基因，验证HBV基因对肝细胞生长和炎症反应的影响。
2.特异性表达uPA转基因小鼠的制备
利用肝细胞引导元件和CRISPR/Cas9技术，构建胆汁淤积性肝病的治疗模型。依次分为以下步骤：
（1）设计并合成介导uPA表达的修饰RNA；
（2）利用介导RNA指导Cas9切割小鼠基因组，将uPA基因集成到肝脏特异性表达元件的前面，建立特异性表达uPA的小鼠模型；
（3）检测小鼠肝脏中uPA的表达水平，并验证该模型对胆汁淤积性肝病的治疗效果。
三、任务进度
本任务的进度安排如下：
第一年：
6月-9月：收集已有文献，设计构建HBV感染小鼠模型的实验方案；
10月-12月：构建HBV感染小鼠模型并鉴定。
第二年：
1月-3月：设计构建HBV基因敲除小鼠模型的实验方案；
4月-6月：构建HBV基因敲除小鼠模型并鉴定；
7月-9月：设计构建特异性表达uPA转基因小鼠的实验方案；
10月-12月：设计介导RNA、CRISPR/Cas9表达载体，质粒构建和纯化，装备小鼠鬃毛的毛细管注射。
第三年：
1月-3月：合成介导uPA表达的修饰RNA；
4月-6月：利用介导RNA和Cas9切割基因组，建立特异性表达uPA的小鼠模型；
7月-9月：检测小鼠肝脏中uPA的表达水平并验证该模型对胆汁淤积性肝病的治疗效果。
四、任务成果统计
本任务取得的成果将包括但不限于以下方面：
1.建立HBV感染小鼠模型和HBV基因敲除小鼠模型，为研究HBV感染和肝炎发生提供实验基础。
2.建立特异性表达uPA转基因小鼠，为肝移植和药物代谢研究提供实验基础。
3.相应的实验方法和技术文献。
4.本任务成果应在相关领域做出贡献，发表论文至少1篇。