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精品文档 选修三知识点 专题一基因工程 一、工具 1、限制酶 (1)来源:主要从原核生物中分离纯化而来。 (2)作用:识别特定的核苷酸序列并切开相应两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 (3)结果:产生黏性末端或平末端。 2、DNA连接酶 常用类型E·coliDNA连接酶TDNA连接酶 4 来源大肠杆菌T噬菌体 4 功能连接黏性末端连接黏性末端和平末端 结果恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 3、载体 常用载体:质粒动植物病毒λ噬菌体衍生物等 化学本质:双链环状DNA分子 能自我复制 质粒 特点有一个至多个限制酶切割位点  有特殊的标记基因 载体具备的条件 条件适应性 稳定并能自我复制目的基因稳定存在且数量可扩大 有一个至多个限制酶切割位点可携带多个或多种外源基因 ) 具有特殊的标记基因(如抗生素抗性基因便于重组DNA的鉴定和选择 对宿主细胞无害不影响宿主细胞的生活 精品文档 精品文档 二、基因工程的操作步骤 ①从基因文库中获取(目的基因序列未知) 目的基因的 (1)方法②利用PCR技术扩增(知道其中的一段目的基因) 获取(较小的,目的基因序列已知) ③通过化学方法人工合成 ①目的基因 基因表达载②标记基因 (2)组成 体构建 ③终止子 ④启动子 ①植物:农杆菌转化法、基因枪法、 将目的基因导花粉管通道法 (3)方法 入受体细胞 ②动物:显微注射技术 ③微生物:感受态细胞法(Ca2+处理) 目的基因的 (4)方法 检测与鉴定 补充: 比较 限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶RNA聚合酶 项目 作用 DNA分子DNA分子片段脱氧核苷酸DNA分子核糖核苷酸 底物 作用 磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键碱基对间的氢键磷酸二酯键 部位 作用形成黏性末形成重组形成新的形成单链 转录形成RNA 结果端或平末端DNA分子DNA分子DNA分子 专题二细胞工程 精品文档 精品文档 一、植物组织培养和动物细胞培养 项目植物组织培养动物细胞培养 理论基础植物细胞全能性细胞增殖 培类型固体或半固体培养基液体培养基 养水、矿质元素、维生素、蔗糖、葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生 成分 基氨基酸、琼脂素、促生长因子、动物血清等 动物胚胎或出生不久的幼龄动物 取材植物幼嫩部位或花药等 的器官或组织 过程 新的组织或植株个体,可以体新的细胞系或细胞株,不形成个 结果 现全能性体,不体现全能性 ①植株快速繁殖 ①蛋白质生物制品的生产 ②脱毒植株的培育 ②皮肤移植材料的培育 目的③人工种子 ③检测有毒物质 ④生产药物、杀虫剂等 ④生理、病理、药理学研究 ⑤转基因植物的培育 ①两技术手段培养过程中细胞都进行有丝分裂,都是无性繁殖, 相同点都可称克隆,都不涉及减数分裂 ②均为无菌操作,需要适宜的温度、pH等条件 精品文档 精品文档 二、植物体细胞杂交与动物细胞融合 植物体细胞杂交动物细胞融合 原理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性 细胞A、B 细胞A、B 原生质体A、B 杂交细胞 过 融合的原生质体 程 杂种细胞 多个相同 杂交细胞 杂种植株 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 相关酶纤维素酶和果胶酶 物理法:离心、电激、振动; 除物理法和化学法外还可以用灭活 融合方法化学法:聚乙二醇等试剂诱导 的病毒诱导 杂交细胞 结果杂种植株 突破了有性杂交方法的局限,使远 克服了远缘杂交的不亲和性,获得杂 意义缘杂交成为可能 种植株 三、单克隆抗体 精品文档 精品文档 原理:细胞膜的流动性 单克隆抗体制备中两次筛选的目的: (1)第一次筛选是将未融合的B淋巴 细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合、瘤瘤 融合的细胞通过选择培养基淘汰,筛选 出B瘤融合的细胞。 (2)第二次筛选是将产生特定抗体的 B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测 的办法筛选出来。因为从体内取免疫过 的B淋巴细胞时取出很多种,形成的杂 交瘤细胞有很多种,所以需筛选出产生 特定抗体的杂交瘤细胞。 四核移植(课本P48) 原理:动物细胞核具有全能性 专题三胚胎工程 一体内受精和早期胚胎发育 1.精子和卵子的发生 (1)精子的发生: ①场所:睾丸的曲细精管。 ②时间:初情期→生殖机能衰退。 精品文档 精品文档 第一阶段:初级精母细胞的形成(精原细胞发生染色体复制到初级精母细胞)  第二阶段:精子细胞的形成(减一,减二)  细胞核→精子头的主要部分 ③高尔基体→头部顶体 第三阶段: 中心体→精子尾 精子变形 线粒体→聚集在尾的基部形成 线粒体鞘 (2)卵子的发生:(课本P63) ①场所:卵巢。 ②时间:胎儿期和初