纳豆激酶基因克隆及其在大肠杆菌和乳酸乳球菌的表达研究的任务书.docx

纳豆激酶基因克隆及其在大肠杆菌和乳酸乳球菌的表达研究的任务书
任务书
一、任务背景
纳豆激酶是一种存在于纳豆中的酶，在纳豆制备过程中起到了重要的作用。该酶具有较强的溶菌作用和纤维蛋白溶解作用，对于纳豆的质地、口感、风味等方面均有重要影响。目前，纳豆激酶的基因克隆和表达研究已经引起了广泛关注。
本次任务的背景是对纳豆激酶基因的克隆和表达进行深入研究，探究其在大肠杆菌和乳酸乳球菌中的表达规律，为深入研究纳豆激酶的分子生物学和生物化学性质奠定基础。
二、任务目标
1.纳豆激酶基因的克隆和测序；
2.构建纳豆激酶表达载体，并对其进行酶切和连接；
3.将经过测序的纳豆激酶基因插入表达载体中，并在大肠杆菌和乳酸乳球菌中进行表达；
4.对表达的纳豆激酶进行纯化和鉴定，并探究其酶学性质；
5.分析纳豆激酶在大肠杆菌和乳酸乳球菌中的表达差异及相关的调控机制。
三、具体实施方案
1.纳豆激酶基因的克隆和测序
通过PCR扩增纳豆激酶基因，并进行测序，得到其完整的基因序列。
2.构建纳豆激酶表达载体并进行酶切和连接
将纳豆激酶基因克隆至表达载体中，并通过酶切和连接，构建完整的表达载体。
3.表达载体转化和表达
将构建好的表达载体转化至大肠杆菌和乳酸乳球菌中，使用表达诱导剂进行表达，并收集表达的蛋白样品。
4.纯化和鉴定
对表达的纳豆激酶进行纯化，并通过酶学性质的鉴定，分析其活性、稳定性等性质。
5.分析纳豆激酶在大肠杆菌和乳酸乳球菌中的表达及调控机制
通过比较两种菌株中纳豆激酶的表达量，探究其表达差异及相关的调控机制。
四、任务重点
1.纳豆激酶基因的克隆和测序；
2.构建纳豆激酶表达载体，并对其进行酶切和连接；
3.将经过测序的纳豆激酶基因插入表达载体中，并在大肠杆菌和乳酸乳球菌中进行表达；
4.对表达的纳豆激酶进行纯化和鉴定，并探究其酶学性质。
五、任务时间节点
任务开始日期：2022年1月1日
任务完成日期：2023年1月1日
六、预期结果
1.成功克隆和测序纳豆激酶基因；
2.构建成功的纳豆激酶表达载体，并在大肠杆菌和乳酸乳球菌中成功表达纳豆激酶；
3.成功纯化纳豆激酶，并探究其酶学性质；
4.分析纳豆激酶在两种菌株中的表达差异及相关调控机制。
七、经费预算
任务经费总计：100万元
经费用途：
1.试剂、设备及耗材费用：80万元
2.人力费用：20万元
注：人力费用包括实验人员薪资、差旅费用及科研论文发表费用等。