加味四逆散及其拆方影响HSC增殖的实验研究的任务书.docx

加味四逆散及其拆方影响HSC增殖的实验研究的任务书
任务书
一、研究背景
加味四逆散是中医经典方剂四逆散的改良配方之一，其主要治疗作用在于恢复人体正常的气血流通，治疗休克、冻疮、白细胞减少症等疾病。近年来，研究发现加味四逆散对于肝脏疾病也有一定的治疗作用，尤其是在治疗肝纤维化和肝硬化方面具有显著的效果。
肝纤维化和肝硬化是肝脏常见的慢性疾病，其发病率不断上升。哺乳动物肝内的基质细胞（肝星状细胞，HSC）是肝纤维化和肝硬化的重要细胞类型。在肝脏损伤或因某种原因引起肝纤维化和肝硬化时，肝星状细胞（HSC）会进行转化、迁移和增殖，导致基质合成增加并进而形成纤维细胞，从而逐渐导致肝脏组织的纤维化。因此，调节HSC的增殖，成为改善肝脏纤维化和肝硬化的一种重要途径。
二、研究目的
本研究旨在探究加味四逆散及其拆方对HSC增殖的影响，为加味四逆散在治疗肝纤维化和肝硬化中的应用提供实验数据支持。
三、研究内容及方案
1.实验材料
肝星状细胞西门脊鳞状细胞留样。
加味四逆散（包括黄芪10克，桂枝10克，杜仲10克，附子10克，炙甘草10克，黄连10克，桃仁10克，红花10克）。
拆方1（包括黄芪10克，桂枝10克，杜仲10克，附子10克，红花10克）。
拆方2（包括炙甘草10克，黄连10克，桃仁10克）。
2.实验设计
本实验采用体外培养的方式，以西门脊鳞状细胞为研究对象，分为加味四逆散组、拆方1组、拆方2组和对照组四组。每组分别设立以下处理：无处理，低浓度加味四逆散处理，中浓度加味四逆散处理，高浓度加味四逆散处理，低浓度拆方1处理，中浓度拆方1处理，高浓度拆方1处理，低浓度拆方2处理，中浓度拆方2处理，高浓度拆方2处理。使用MTT法检测HSC增殖情况。
3.实验步骤
（1）取出冻存的西门脊鳞状细胞，用1mlDMEM培养基分散细胞，并于25cm2培养瓶中培养至细胞密度达到70％时进行处理。
（2）按组分别处理细胞：无处理，低浓度加味四逆散处理（2.5mg/mL），中浓度加味四逆散处理（5mg/mL），高浓度加味四逆散处理（10mg/mL），低浓度拆方1处理（2.5mg/mL），中浓度拆方1处理（5mg/mL），高浓度拆方1处理（10mg/mL），低浓度拆方2处理（2.5mg/mL），中浓度拆方2处理（5mg/mL），高浓度拆方2处理（10mg/mL）。
（3）每组细胞共培养48h，培养结束后，移除培养基，加入150μL接种培养基后加MTT20μL，在室温下暗处孵育4小时。
（4）去除MTT和接种培养基，加DMSO200μL混合，振荡10min至紫色溶液溶解完全后，以单位时间的吸光度值（OD）读取450nm波长的光密度值。
4.实验数据处理
应用SPSS22.0分析软件进行数据处理，采用正态性检验和方差分析(AVOVA)进行数据分析，以p＜0.05作为显著性水平。
四、研究意义
本研究将为了解加味四逆散及其拆方对HSC增殖的影响提供实验数据支持，为加味四逆散在治疗肝脏疾病方面的应用提供一定参考。同时，本研究的理论和实践意义将有助于进一步丰富中药治疗肝脏疾病的相关机制和疗效研究。