人源抗TNF-α骆驼化抗体的制备研究的任务书.docx

人源抗TNF-α骆驼化抗体的制备研究的任务书
任务书
任务名称：人源抗TNF-α骆驼化抗体的制备研究
任务背景：肿瘤坏死因子TNF-α在免疫炎症反应中扮演着重要的角色，因此以其为标靶的治疗手段备受关注。而骆驼单克隆抗体技术的发展则为TNF-α治疗提供了新的思路和选择。本研究旨在制备一种具有较高亲和力、稳定性和生物活性的人源抗TNF-α骆驼化抗体。
任务目标：
1.设计合适的免疫策略，免疫人源TNF-α蛋白；
2.使用骆驼B细胞对免疫后的人源TNF-α进行筛选，得到具有较高抗原亲和力的单克隆B细胞；
3.分离得到单克隆B细胞，提取其DNA并进行cDNA合成；
4.将cDNA插入到骆驼源重链（VHH）和轻链（VL）的质粒中；
5.进行重链和轻链的转染，得到骆驼化的人源抗TNF-α抗体；
6.对制备的抗体进行检测，包括亲和力、特异性、稳定性、生物活性等；
7.进行抗体的纯化和大规模制备；
8.测试抗体的效力和安全性。
任务步骤：
1.购买并纯化人源TNF-α蛋白；
2.制备小鼠单克隆抗体，并对其进行ELISA筛选，得到具有较高抗原亲和力的单B细胞；
3.提取B细胞DNA并进行cDNA合成；
4.使用PCR扩增VHH和VL的DNA序列，并对其进行测序；
5.将VHH和VL的DNA序列插入到骆驼源VHH和VL的质粒中；
6.利用人源TNF-α对筛选出的骆驼单克隆抗体进行ELISA检测，筛选出抗原亲和力、特异性和稳定性较高的抗体基因；
7.进行重链和轻链的转染，并通过检测筛选出合适的骆驼化人源抗TNF-α抗体；
8.对骆驼化人源抗TNF-α抗体进行亲和力检测、特异性检测、稳定性检测、生物活性检测等；
9.对制备的抗体进行纯化和大规模制备；
10.对制备的抗体进行药理学和毒理学测试，测试其效力和安全性。
任务成果：
1.制备出具有较高亲和力、稳定性和生物活性的骆驼化人源抗TNF-α抗体；
2.对制备的抗体进行了检测和测试，得出其相应的性能指标；
3.对制备的抗体进行了纯化和大规模制备，为进一步应用提供支持；
4.测试了制备的抗体的效力和安全性，为未来临床应用打下基础。
任务周期：3年
任务预算：100万元
任务负责人：XXX
任务执行单位：XXX研究所
参考文献：
1.Bozza,M.A.;etal.Production,purificationandapplicationsofacamelidsingle-domainantibodyspecifictohumanTNF-α.JournalofImmunologicalMethods,2013,389(1-2):22-30.
2.HajariTaheri,Farnoosh;Mansouri,Kamran;Ebrahimi,Mehdi;etal.ProductionandEvaluationofAnti-HumanTNF-αCamelidSingleDomainAntibody.InternationalJournalofPeptideResearchandTherapeutics,2019,25(3):1115-1121.
3.Arabi,Ali;Torabi-Rahvar,Mohamad;Behdani,Mahdi;etal.NewDevelopmentsinPhageDisplayTechnologyforDrugDiscovery.ExpertOpiniononDrugDiscovery,2018,13(2):117-130.