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日照市亚I-O型口蹄疫疫苗免疫效果检测与分析报告

摘要于2008年秋季进行了日照市亚I-O型口蹄疫疫苗免疫效果检测,结果表
明,日照市牛亚I型口蹄疫和O型口蹄疫免疫合格率都达到80%以上;而猪O型口
蹄疫免疫合格率偏低,刚达到农业部70%以上的要求。对猪O型口蹄疫免疫合格
率偏低的原因进行了分析,建议要针对检测情况抓紧时间组织补免,确保免疫程度
达到1000%。

关键词猪O型口蹄疫;牛亚I型口蹄疫;牛O型口蹄疫;免疫效果;检测

2008年11月,日照市秋季重大动物疫病防疫结束后,为及时对免疫效果进行
检测,笔者按照《山东省2008年高致病性禽流感、口蹄疫等主要动物疫病监测方
案》要求,对全市的种畜禽场、养殖场、活禽交易市场、猪屠宰场进行集中采样
检测。随机抽查了16个场(户),采集血清样品232份,其中7个养猪场、6个奶牛
场、3个屠宰场。

1检测方法

采用兰州兽医研究所研制的亚州I型口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒(生
产批号:2008052802)、O型口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒(生产批号
2008052801)进行检测。

2器材的准备

亚I-O型口蹄疫液相阻断酶联免疫吸附试验检测试剂盒,5～50μL移液器:多
道与单道各数把,37℃温箱,酶标仪,其他试验耗材。

3试验操作步骤

3.1包被固相

用包被缓冲液稀释兔抗血清至工作浓度,在ELISA板每孔加50μL。室温振荡
30min,然后置湿盒中室温过夜。

3.2抗原-抗体(对照和待检血清)的预告结合(液相阻断)

各对照和待检血清在LB-ELISA中的布局,在第1行1～10孔加入不同样品,
按12.5μL样品+87.5μLPBST工作液,按列倍比稀释。封板后室温振荡30min,然后
置湿盒中4℃过夜。

3.3转移抗原-血清混合液

将包被的ELISA板取出,洗涤5次,扣干。将抗原-血清混合液反应板取出,室
温放置20～30min。将抗原-血清混合液转移到ELISA板相应各孔中,每孔50μL,
置37℃温箱1h。

3.4加检测抗体

将装有抗原—血清混合液的ELISA板取出,洗涤5次,扣干。以豚鼠抗血清稀
释液将豚鼠抗血清稀释至工作浓度,混匀后每孔加50μL,置37℃温箱1h。

3.5加酶结合物

取出ELISA板,洗涤5次,扣干。以PBST工作液将酶结合物稀释至工作浓度,
混匀后每孔加50μL,置37℃温箱1h。

3.6加底物溶液

取出ELISA板,洗涤5次,扣干。加入底物溶液,每孔加50mL,置37℃温箱
15min。

3.7加终止液

如表1所示,每孔加50μL终止液,轻轻振荡混匀,在酶标仪上读数。

4检测结果

如表1所示,本次集中检测,共抽查了16个场户,采集血清样品232份。其中7
个种猪场、3个屠宰场,采样105份,进行O型口蹄疫检测,合格81份,免疫合格率
为77.1%;6个牛场,采样127份,进行O型口蹄疫检测,合格118份,免疫合格率为
92.9%;进行亚I型检测,合格107份,免疫合格率为84.3%。

5检测结果分析

根据本次检测结果,日照市牛亚I型和O型口蹄疫免疫合格率都能达到80%

以上;而猪O型口蹄疫免疫合格率偏低,刚达到农业部70%以上的要求,明显低于
2007年,屠宰场的表现尤其明显。其主要原因可能有:①在秋防集中免疫过程中,4
种强制免疫疫苗,有3种是猪用疫苗,3种疫苗的免疫必须间隔一定的时间;加上近
几年来高致病性猪蓝耳病危害性已经引起了养殖场户的高度重视,猪蓝耳、猪瘟
疫苗大都优先免疫,而将口蹄疫疫苗免疫拖后,免疫时间距离采样时间太短。②本
次抽查加大了猪屠宰场的比重,而屠宰场猪的来源多是农村的散养户,其免疫密度
低于养殖场。③奶牛场户的免疫质量较好,但免疫效果不平衡。目前,日照市注射
的都是亚I-O型口蹄疫二联苗,但二者的免疫效果却不一样,O型疫苗的免疫效果
明显好于亚I,可能是两毒株的免疫原性有差异或由于常期使用O型口蹄疫疫苗
有关。另外,本次抽查的牛场除1个肉牛场外,其他都是奶牛场户,说明日照市奶牛
场户的免疫质量比较好。

6建议

根据本次检测结果,日照市猪O型、牛亚I-O型口蹄疫免疫合格率虽然都能
达到农业部70%以上的要求,但有关区县应针对各养殖场的检测情况抓紧时间组
织补免,确保免疫密度达到100%,以达到重大动物疫病的防控效果。