酵母菌的分离及培养条件的优化(“培育”文档)共33张.pptx

实验设计型实验酵母菌的分别及培育条件的优化二、根本原理
酵母菌是单细胞真菌生物，具有很高的营养价值，特别是含有较多蛋白质、B族维生素、核酸和矿物质，同时也能产生一些保健功能活性物。因酵母属于简单的单细胞真核生物，易于培育，且生长迅速，被广泛用于现代生物学研讨中。是遗传工程研讨过程中常用的受体菌种。从自然界或商品中分别纯的酵母菌株，通常采用平板或斜面涂布划线法。这两种方法简单有效，是实验室分别纯化菌种常用到的方法。
在发酵过程中定时地取样测定，包括对菌体进展镜检、测定不同时期发酵液的菌体浓度、残留的复原糖等参数，动态地了解发酵过程中过程变量的变化，分析菌体生长、基质耗费、产物生成的速度，研讨发酵动力学，为消费中优化培育条件提供数据根据。三、实验资料
〔一〕菌种：从安琪酵母中分别的酵母菌
〔二〕培育基
根底培育基YPD：
酵母浸粉1%蛋白胨2%葡萄糖2%固体培育基再加琼脂2%
优化N源培育基：
酵母浸粉1%(NH4)2SO42%葡萄糖2%；
酵母浸粉1%(NH4)2SO44%葡萄糖2%；
酵母浸粉1%NH4NO32%葡萄糖2%；
酵母浸粉1%NH4NO34%葡萄糖2%；
酵母浸粉1%NaNO32%葡萄糖2%；
酵母浸粉1%NaNO34%葡萄糖2%；〔三〕仪器设备
超净任务台，756型分光光度计，旋转式摇床，恒温培育箱，全自动灭菌锅，三角瓶、涂布器、移液管、平皿等玻璃仪器。
〔四〕试剂
酵母浸粉、蛋白胨、葡萄糖、琼脂(NH4)2SO42%、(NH4)2SO44%、NH4NO32%NH4NO34%、NaNO32%、NaNO34%等；裴林试剂甲液、裴林试剂乙液；NaOH溶液、HCl等。四实验内容
1、分别单菌落
〔1〕实验物品灭菌
仪器：包扎9个移液管、9个涂布器、9个装有9ml蒸馏水的试管、16个平板、
液体：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分装两个三角瓶中，然后每个三角瓶放入2.4g琼脂，剩下60ml为液体培育基，然后将以上设备拿去灭菌〔2〕划线涂布
超净台上：
1、把240ml的培育基分别倒入15个平板，每个平板为12~13ml，平板分别标10-2~10-10，还有倒一个斜面
2、取1ml的菌原液进展稀释梯度为10-3~10-10
3、划线涂布划线为原液从10-2~10-7；涂布从10-3~10-10用对应的稀释梯度液，10-2用原液涂布2、种子培育氮源的优化方案3培育基温度到达95℃后，缓慢翻开进气阀及底阀处的蒸汽阀，同时向罐内进气，待罐压升至0.
1、NB型空气过滤器消毒
NaNO32%0.
整个培育过程的总取样量普通不超越发酵液体积的10%，否那么诸如氧传送速度等会遭到影响。
培育时间:12月4号早上10:37到12月5号早上8:47十个小时左右
2翻开底阀和取样放料阀，放出少量培育液后封锁取样放料阀。
1、经察看菌种生长发现稀释梯度为10-8、10-9的菌种进展涂布生长较好
〔NH4〕2SO44%+5ml种子液
4按工艺要求调整好PH后，拧紧进料口螺盖。
08ml1.
2、灭菌装料量60%；
1、把240ml的培育基分别倒入15个平板，每个平板为12~13ml，平板分别标10-2~10-10，还有倒一个斜面
〔NH4〕2SO42%7.接种培育将种子液按9%的接种量接种到以下发酵瓶中
〔NH4〕2SO42%+5ml种子液
〔NH4〕2SO44%+5ml种子液
NH4NO32%+5ml种子液
NH4NO34%+5ml种子液
NaNO32%+5ml种子液
NaNO34%+5ml种子液
蛋白胨+5ml种子液培育

时间9：20
条件180r/min30℃的摇床测种子液的OD值取样测发酵瓶的PH值OD值及残糖量一小时后〔12：30〕
PH值均为5
OD值
稀释原液
〔NH4〕2SO42%0.210A1.066A
〔NH4〕2SO44%0.167A0.939A
NH4NO32%0.192A1.036A
NH4NO34%0.106A0.833A
NaNO32%0.167A1.092A
NaNO34%0.161A1.102A
对比0.262A1.328A残糖量
空白
费林试剂A5ml+费林试剂B5ml+10ml水+6ml规范葡萄糖
样品
费林试剂A5ml+费林试剂B5ml+10ml水+0.5ml样品
测定结果耗费规范葡萄糖残糖量
〔NH4〕2SO42%7.08ml1.744%
〔NH4〕2SO44%6.5ml1.86%
对比6.98ml1.764%NH4NO34%0.
4按工艺要求调整好PH后，拧紧进料口螺盖。
5gNH4NO32g葡萄糖1g
1预备好合格的摇床菌种，接种量根据工艺要求确定。
3、掌握固体斜面、平板的制备技术，可以经过划线、涂布等方法分别菌种。
操作留意：空气流量计