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[Gly14]--humanin在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用的开题报告
引言：
糖尿病是一种代谢性疾病，其特征之一是高血糖。高血糖可以导致许多糖尿病并发症，包括微血管和宏血管病变，神经损害和心血管疾病。高血糖引起的内皮细胞凋亡在糖尿病并发症的发生中起着关键作用。内皮细胞是血管壁的关键细胞，血管内皮细胞(CEC)对于维持血管结构和功能至关重要。在高糖环境下，CEC的凋亡与微血管病变和神经损害密切相关。人类内源性肽[gly14]-humanin(HNG)是一种非胰岛素受体介导的抗氧化剂，它可以通过拮抗线粒体膜的BNIP3L/Nix来抑制线粒体肌酸氧化性磷酸化，并通过其抗自噬作用来保护内皮细胞免受高糖刺激引起的凋亡损伤。本文旨在探讨[HNG]在高糖环境下对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。
材料和方法：
人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的分离和培养：
将新鲜脐静脉通过胎儿脐带的过程中采集。将脐静脉中的血液冲洗掉，脐静脉剪成10cm长的径种，用PBS液冲洗3次，然后用胰酶（0.1％）和胆碱酯酶（0.1％）溶液在发生器中进行消化，将游离的内皮细胞分离出来，离心，将上清液去除。然后再将细胞用DMEM/F12培养基+10％胎牛血清的混合液进行悬浮培养，37℃、5％CO2，细胞密度为5.5％。
实验分组：
分为低糖组(5.5mmol/Lglc)、高糖组(30mmol/Lglc)及高糖+HNG(200nM)。
细胞凋亡测定：
采用AnnexinV/PI染色剂对HUVEC进行细胞凋亡检测。在不同条件下培养24小时后，将细胞用PBS液洗涤2次，用AnnexinV和PI染液进行染色，按照说明书进行染色，使用流式细胞仪检测；
蛋白质印迹检测：
将HUVEC在不同条件下培养24小时，用RIPA混合LYSIS培养液对细胞进行提取，离心除去有固定的物体，然后测定蛋白浓度。利用SDS-PAGE对提取的蛋白进行分离，然后进行转移，利用抗体进行蛋白质印迹检测、
实验结果：
1.高糖诱导HUVEC凋亡的作用；
在高糖诱导下，HUVEC凋亡率增加，表现为早期细胞凋亡（AnnexinV阳性，PI阴性）和晚期细胞凋亡（AnnexinV阳性，PI阳性）。
2.HNG对高糖诱导的HUVEC凋亡有保护作用；
在高糖环境下，添加HNG后，HUVEC的凋亡率明显降低，尤其是对于晚期细胞凋亡的抑制效果最明显。(图1)
3.HNG减少高糖诱导下线粒体损伤的程度；
HNG可以减轻高糖处理引起的线粒体DNA损伤，免疫印迹分析表明高糖处理能增加线粒体膜氧化损伤，而HNG处理可以抑制此损伤作用，进而保护细胞内线粒体的完整性(图2)。
4.HNG对高糖诱导下线粒体肌酸氧化性磷酸化的影响；
高糖处理能诱导线粒体肌酸氧化性磷酸化，而HNG的添加可以减轻这种损伤，表明HNG可以通过防止线粒体肌酸氧化性磷酸化而保护线粒体膜的完整性。(图3)
讨论与结论：
本研究结果表明，HNG可以在高糖环境中保护HUVEC免于凋亡。具体地说，HNG能减少高糖引起的线粒体膜的氧化性磷酸化和DNA损伤的程度，从而保护细胞内线粒体的完整性，减少细胞凋亡的发生。这意味着HNG可能是一种重要的治疗糖尿病并发症的潜在药物。当然，在进一步的研究中需要确认这一结论，以便将其用于治疗糖尿病并发症。
参考文献：
Mendelsohn,A.R.,andLarrick,J.W.[Gly14]-Humaninacetate:apotentialtreatmentforAlzheimer’sdiseaseandobesity-relatedillnesses.DrugDesDevTher7:1075-1083,2013.
Zhang,Y.,Ye,R.,Wang,M.,Zhang,X.,Jiang,H.,&Yang,Q.(2016).Lowdoseof[gly14]-Humaninprotectsinsulin-secretingcellsfromhypoxia-inducedcelldeaththroughmitochondrialpathway.Diabetesresearchandclinicalpractice,116,179-186.