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miRNA-720对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及机制
引言
近年来，基因表达修正通过选择性调控微小RNA（miRNA）的表达来抑制基因表达，并在各种疾病的预防和治疗中引起越来越多的关注。其中，miRNA-720在多种疾病中已经被证明起着重要作用，如乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、前列腺癌等。此外，由于其在细胞凋亡和免疫调节中的重要作用，因此miRNA-720的作用机制引起了广泛的关注。本文探讨了miRNA-720在TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡中的作用，并探讨了其作用机制。
材料和方法
HUVCE细胞株培养
HUVCE细胞株由中国药科大学细胞中心提供，细胞株在含有10％胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中进行培养，室温为37℃。
miRNA转染和细胞处理
对HUVEC细胞株进行转染后处理TNF-α使细胞产生变化。先将HUVEC细胞株转染无关miRNA或miR-720具体方法如下：
1.按照转膜试验，使用10μl/mlHiPerFect转染试剂将miRNA-720和无关miRNA分别转移成HUVEC细胞株。
2.在培养基中，依照药物生产商建议的浓度，加入TNF-α进行处理。
3.该系统设计了四组试验：（1）对照组；（2）无关miRNA组（转染无关miRNA后处理TNF-α）；（3）miRNA-720组（转染miRNA-720后处理TNF-α）；（4）miRNA-720雄性激素受体（AR）组（先用miRNA-720转染后处理TNF-α和雄性激素）。
检测细胞凋亡和生长
在各种实验后，使用流式细胞仪和石蜡包裹法对HUVEC细胞株进行测试。使用qRT-PCR和Westernblot进行miRNA-720和细胞凋亡相关因子的定量。
结果
miRNA-720显著降低TNF-α诱导的HUVEC细胞凋亡。
在转染miRNA-720之后，与无关miRNA组和对照组相比，TNF-α诱导的细胞凋亡显着降低。另外，我们还发现miRNA-720雄激素和AR（雄性激素受体）的结合抑制了miRNA-720抑制TNF-α诱导的HUVEC细胞凋亡的效果。因此，miRNA-720能够通过抑制TNF-α的效应而抑制HUVEC细胞的凋亡。
miRNA-720通过激活PI3K-AKT信号通路抑制HUVEC细胞凋亡。
进一步研究表明，miRNA-720通过激活PI3K-AKT信号通路来抑制HUVEC细胞的凋亡。特别是，miRNA-720抑制了TNF-α诱导的AKT磷酸化，但没有对总AKT表达水平产生影响。而miRNA-720浓度越高，则其对AKT磷酸化的抑制作用越强。因此，考虑到AKT信号通路在细胞凋亡中所起的重要作用，我们得出结论：miRNA-720通过激活PI3K-AKT信号通路来抑制TNF-α诱导的HUVEC细胞凋亡。
讨论
在本次研究中，miRNA-720抑制了HUVEC细胞的TNF-α诱导的凋亡，并且这种现象在miRNA-720雄激素和AR的结合下失去了作用。我们还注意到，与无关miRNA组和对照组相比，miRNA-720可以通过激活PI3K-AKT信号通路来抑制TNF-α诱导的HUVEC细胞凋亡这一过程。
miRNA介导的基因调控机制可通过对靶标的特异性结合而抑制其翻译和延长生命。miRNA-720是miRNA簇的一部分，已被证明在乳腺癌和肺癌等多种恶性肿瘤中起着重要作用，在其中被发现其具有多种生物学功能，如通过调节肿瘤细胞的增殖和侵袭、调节肿瘤细胞的周期和细胞凋亡等。在HUVEC细胞中，我们显示了miRNA-720所表现的细胞保护性功能，其中抵消了TNF-α诱导的凋亡。AR是由miRNA-720调节心血管疾病的信号分子之一。
同时，我们也注意到，PI3K-AKT被描述为多种信号传递网络中的重要途径。AKT作为PI3K的直接下游分子在细胞凋亡、生长和代谢等方面都具有重要作用。当miRNA-720在HUVEC细胞中被过度表达时，会导致其不能被AKT磷酸化，从而在一定程度上抑制了细胞凋亡。此外，我们也观察到miRNA-720的抑制通过激活PI3K-AKT的信号通路实现。
结论
总之，我们发现miRNA-720在TNF-α诱导的HUVEC细胞凋亡中起到了细胞保护性的作用，并且这一作用是由于其激活了PI3K-AKT信号通路。此外，miRNA-720调节AR分子对细胞的凋亡也具有重要的调节作用。在未来，我们将进一步研究在生理和疾病过程中，miRNA-720对脐静脉内皮细胞的进一步作用，以期能为恶性疾病的治疗提供更精确的针对性和方向。