蒲公英中绿原酸纤维素酶法提取工艺.doc

蒲公英中绿原酸纤维素酶法提取工艺的优化
摘要：为了研讨纤维素酶法提取蒲公英（ｔａｒａｘａｃｕｍｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍｈａｎｄ．－ｍａｚｚ）中绿原酸的工艺，通过单要素试验探讨加酶量、料液比、提取温度、提取时间、ｐｈ对绿原酸提取率的影响，并通过正交试验对影响绿原酸提取率的参数进行优化。结果表明，蒲公英中绿原酸提取的最好工艺条件为ｐｈ６．０、加酶量３．０ｍｌ、提取温度５０℃、提取时间１．０ｈ，此条件下绿原酸提取率为１０．０３１ｍｇ／ｇ。
关键词：蒲公英（ｔａｒａｘａｃｕｍｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍｈａｎｄ．－ｍａｚｚ）；绿原酸；提取工艺
ａｂｓｔｒａｃｔ：ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄｉｎｄａｎｄｅｌｉｏｎ（ｔａｒａｘａｃｕｍｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍｈａｎｄ．－ｍａｚｚ．）ｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｃｅｌｌｕｌｏｓｅ．ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｎｚｙｍｅｄｏｓａｇｅ，ｒａｗｍａｔｅｒｉａｌｔｏｓｏｌｖｅｎｔｒａｔｉｏ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔｔｉｍｅａｎｄｐｈｏｎｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄｗｅｒｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｂａｓｅｄｏｎｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｔｅｓｔｓ．ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｐｈ６．０；ｅｎｚｙｍｅｄｏｓａｇｅ，３．０ｍｌ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，５０℃；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ１．０ｈ；ｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗａｓ１０．０３１ｍｇ／ｇ．
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蒲公英（ｔａｒａｘａｃｕｍｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍｈａｎｄ．－ｍａｚｚ）别名蒲公草、黄花地丁、黄花三七、婆婆丁等，原产于欧洲，在中国大部分地区均有分布，其味甘苦，性寒，既是营养保健野菜，也是常用的中药材，为药食同源植物之一，是开发绿色天然植物型营养保健品理想的宝贵资源。
蒲公英含碳水化合物、脂肪、蛋白质、多种矿物资、微量元素和维生素等营养成分，此外还含有蒲公英甾醇、蒲公英苦素、皂苷、胆碱、肌醇、咖啡酸、绿原酸、黄酮类等功能性化学成分，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性链球菌、卡他球菌均有明显的按捺造用，即具有广谱抑菌作用，此外还具有益胆保肝、抗胃损伤、抗肿瘤、抗氧化、加强免疫等功能［１，２］。其中的绿原酸是一种多酚类物资，具有重要的生理活性，有抗氧化、抗艾滋病毒、抗致畸、抗过敏、抗肿瘤细胞毒活性、对透明质酸酶和葡萄糖－６－磷酸酶有按捺造用等功能［3］。因而蒲公英及其绿原酸成为功能性食品研讨开发的热点，中国国内外已开发出蒲公英饮料、蒲公英酒、咖啡、糕点、糖果和蒲公英花粉和蒲公英根粉等保健食品。目前，绿原酸提取的原料主要是金银花、杜仲叶，另外有葵粕、稻壳、甘薯、杭白菊、牛蒡叶等［4－１５］，其中蒲公英来源丰富，部分学者用水提或醇提方法进行了蒲公英中绿原酸提取的研讨［１６］，而纤维素酶法具有条件温和、没有溶剂残留等优点。
研讨采用纤维素酶法提取蒲公英中的绿原酸，用分光光度法测定提取液中绿原酸含量，计算绿原酸提取率，并对影响绿原酸提取率的要素进行了初步探讨，优化了绿原酸提取的工艺，为提高蒲公英的综合利用价值提供参考。
１材料与方法
１．１材料
１．１．１原料与试剂蒲公英为２０１１年５月２７日采自山东省烟台市郊区的农田，将其于低温烘干粉碎过４０目筛；３５ｋｕ／ｇ纤维素酶购自北京梦怡美生物科技无量公司，使用前配成5g/l纤维素酶；绿原酸标准品（纯度＞９８％）购自北京中科三捷生物无量公司；无水甲醇、无水乙醇、盐酸均为分析纯。
１．１．２仪器与设备ｈｗ·ｙｓ型数显恒温水浴锅购自浙江舟山市定海区海源仪器厂，电子分析天平购自赛多利斯科学仪器（北京）无量公司，ｔ６新世纪紫外可见分光光度计购自北京普析通用仪器无量公司，ｐｈｓ－３ｃ型精密酸度计购自上海精密科学仪器无量公司。
１．２方法
１．２．１纤维素酶法
１）工艺流程。选材→称量→加去离子水→加酶液→水浴加热→灭酶→用壳聚糖澄清→抽滤→取滤液定容→用分光光度法测定，计算绿原酸提取率。
绿原酸提取率＝提取液中绿原酸质量（ｍｇ）／原料用量（ｇ）
２）单要素试验。酶法提取的效果主要取决于加酶量、提取温度、提取时间、ｐｈ、料液比等要素，拔取加酶量、提取温度、提取时间、ｐｈ、料液比作为主要考察要素。①加酶量对绿原酸提取率的影响。精确称取６份１ｇ蒲公英干粉分别置于6个５０ｍｌ三角瓶中，分别加入２０ｍｌ去离子水浸润，然后分别加入０、２．０、２．５