抗副猪嗜血杆菌单克隆抗体的制备和竞争ELISA方法的建立的任务书.docx

抗副猪嗜血杆菌单克隆抗体的制备和竞争ELISA方法的建立的任务书
任务书：抗副猪嗜血杆菌单克隆抗体的制备和竞争ELISA方法的建立
一、任务目的
副猪嗜血杆菌是严重威胁猪类健康的一种细菌性疾病，为了对其进行快速而准确的检测，需要开发出一种有效的检测方法。本任务旨在制备一种抗副猪嗜血杆菌的单克隆抗体，并建立一种适用于检测副猪嗜血杆菌的竞争ELISA方法。
二、任务内容
1.副猪嗜血杆菌的培养、纯化和抗原制备
（1）制备副猪嗜血杆菌培养基，对其进行培养、纯化、产菌及保存处理，获得高纯度的副猪嗜血杆菌抗原。
（2）对所制备的抗原进行免疫动物，筛选出抗原特异性较高的抗血清。
2.单克隆抗体的制备
（1）将免疫小鼠的脾细胞和骨髓细胞进行混合，利用多肽激素将其激发成为巨噬细胞。
（2）将巨噬细胞和骆驼血清进行融合，形成杂交瘤细胞。分选并筛选出抗副猪嗜血杆菌的单克隆抗体。
（3）对所得的单克隆抗体进行鉴定，评价其特异性和亲和性等指标。
3.竞争ELISA方法的建立
（1）根据所制备的单克隆抗体和抗原，建立一种适用于检测副猪嗜血杆菌的竞争ELISA方法。
（2）对方法的敏感度、特异性、重复性、稳定性等指标进行评估。
三、任务进度
本任务的实验周期为约12个月，具体进度如下：
月份工作内容
1-2月副猪嗜血杆菌的培养、纯化和抗原制备
3-5月免疫动物，制备抗血清
6-8月单克隆抗体的制备、鉴定
9-11月竞争ELISA方法的建立、优化
12月方法的评价和修正
四、任务预算
本任务所需的预算主要包括材料费、仪器设备费、动物实验费、人员费用等。
五、风险控制
本任务所选用的副猪嗜血杆菌株易产生突变，会对实验结果产生一定影响。同时，在单克隆抗体的制备和筛选过程中，可能存在一定的技术难度和风险。为了最大程度地避免风险，我们将尽力选择较为稳定和成熟的技术方法，保证任务顺利进行。
六、参考文献
1.吉林大学;副猪嗜血杆菌单克隆抗体及其制备方法和用途[P];2019-02-22.
2.Wang,Yongjie,etal.;Cloning,expression,andpurificationofarecombinantproteinofStreptococcussuisserotype2andpreparationofrabbitanti-seraagainstthisprotein.Biologicals,2014,42(6):339-345.
3.Chen,Liuyan,etal.;DevelopmentofWesternBlotandDot-ELISAforDetectingIgGAntibodiesAgainstStreptococcussuisserotype9.JournalofNortheastAgriculturalUniversity,2011,18(5):29-36.