高效液相色谱法定性定量分析【共19张PPT】.ppt

高效液相色谱法定性定量分析提纲一、HPLC系统HPLC示意图市售的用于HPLC的各种微粒填料好多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3，5，7，10μm等，柱效理论值可达5～16万/米。
流动相不含有任何腐蚀性物质；
色谱系统优化和专家系统。
紫外检测器是液相色谱中使用最广泛的一种检测器。
由于每一种化合物在特定的色谱条件下（流动相组成、色谱柱、桂温等相同），其保留值具有特征性，因此可以利用保留值进行定性。
检测器是HPLC系统的三大关键部件之一，作用是把洗脱液中的组分的量转化为电信号。
对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。
色谱系统优化和专家系统。
泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和
固定相的选择：（+++表示好，++表示一般，+表示差）
对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。
流动相不含有任何腐蚀性物质；
流动相不含有任何腐蚀性物质；
它们涉及石油化工产品、食品、合成药物、生物化工产品及环境污染物等，约占全部有机化合物的80％。
对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。操作时的注意事项：

防止任何固体微粒进入泵；
流动相不含有任何腐蚀性物质；
工作时要注意溶剂瓶中的溶剂用完；
泵的工作压力不能大于规定的最大压力；
流动相要先进行脱气，防止产生气泡。进样器：
目前采用较多的是六通
进样阀和自动进样器。
对进样装置的要求：
密封性好，死体积小，
重复性好，保证中心进样，
进样时对色谱系统的压力、
流量影响小。
进样方式可分为：
隔膜进样、停流进样、阀进
样、自动进样。目前应用做多的
是阀进样和自动进样。色谱柱检测器传统的方法是在色谱图上某组分的色谱出现极大值即最高浓度时，通过停泵等手段，使组分在检测池中滞留，然后对检测池中的组分进行全波长扫描，得到该组分的紫外—可见光谱图；
3．利用紫外检测器全波长扫描功能定性
固定相的选择：（+++表示好，++表示一般，+表示差）
它是将已知量的参比物（内标物）加到已知量的试样中．那么试样中参比物的浓度为已知；
对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。
输液泵是HPLC系统中的重要部件之一，
流动相不含有任何腐蚀性物质；
泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和
输液泵是HPLC系统中的重要部件之一，
流动相不含有任何腐蚀性物质；
有机聚合物刚性小、易被压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。
流动相应不改变填料的任何性质；
流动相不含有任何腐蚀性物质；
对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。
2．利用检测器的选择性定性HPLC的固定相和流动相固定相的种类：
硅胶
氧化铝
聚合物
固定相的选择：（+++表示好，++表示一般，+表示差）流动相：
一个理想的流动相溶剂应具有低粘度、与检测其兼容性好、易于得到纯品和低毒性的特征。
选择流动相要考虑的因素：
1.流动相应不改变填料的任何性质；
2.纯度；
3.必须与检测其匹配；
4.粘度要低；
5.对样品的溶解度要适宜；
6.样品易于回收。应用范围定性分析由于液相色谱所用检测器为选择性检测器，对很多组分没有响应，因此液相色谱法较少使则归一化法。
传统的方法是在色谱图上某组分的色谱出现极大值即最高浓度时，通过停泵等手段，使组分在检测池中滞留，然后对检测池中的组分进行全波长扫描，得到该组分的紫外—可见光谱图；
泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和
它是将已知量的参比物（内标物）加到已知量的试样中．那么试样中参比物的浓度为已知；
泵的工作压力不能大于规定的最大压力；
对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。
固定相：即所说的基质或者单体，可以是陶瓷的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。
输液泵是HPLC系统中的重要部件之一，
高效液相色谱法适于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定易分解的、分子量大、不同极性的有机化合物；
HPLC的固定相和流动相
泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和
紫外检测器是液相色谱中使用最广泛的一种检测器。
其余20％的有机化合物，包括永久性气体，易挥发低沸点及中等分子量的化合物，只能用气相色谱法进行分析。
同一种检测器对不同种类的化合物的响应值是不同的，而不同的检测器对同一种化合物的响应也是不同的。
流动相要先进行脱气，防止产生气泡。定量分析