高效液相色谱法教学【全】.ppt

高效液相色谱法前言:我国：课时安排：
第一章：高效液相色谱的基本原理4学时
第二章：高效液相色谱的仪器装置2学时
第三章：液固、键合相色谱3学时
第四章：离子交换色谱和离子对色谱3学时
第五章：凝胶渗透色谱1学时
第六章：实验技术和辅助实验技术1学时
复习1学时
参考书籍：§1－1概述一、色谱法液相色谱仪二、色谱法原理分离原理:三、高效液相色谱法的特点高速:
分析时间较经典液相色谱少得多（交换速度快），一个复杂样品的分析仅需几分钟到几十分钟。高灵敏度
①紫外检测器的最小检测量可达(10-9g)；
荧光检测器的灵敏度可达（10-11g）。
②所需试样很少；微升数量级
高选择性
可分离不同类型化合物和异构体，也可分析在性质上极为相似的化合物
(同位素、同分异构体、空间异构体、手性化合物）高效液相色谱法的特性:四、HPLC与GC区别2．流动相的区别
GC：流动相为惰性，组分与流动相无相互作用
力，只与固定相有相互作用。
HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有相互作用
力，参与和影响色谱分离.
对分离起主要作用。
3．操作条件差别
GC：加温操作
HPLC：室温；高压
说明：气相、液相地位同样重要
两种互补不足的色谱方法
灵敏度：气相﹥液相应用范围：液相﹥气相五、色谱法的分类§１－２基本概念
一、色谱图色谱过程特点：二、色谱参数2.分配系数K分配系数K的讨论3.容量因子k’(capacityfactor)4.容量因子与保留时间的关系5.选择性系数α色谱理论需要解决的问题？§1-3色谱柱的分离效率理论塔板高度H说明：塔板理论的特点和不足：(3)塔板理论无法解释同一色谱柱在
不同的流动相流速下柱效不同的
实验结果，也无法指出影响柱效
的因素及提高柱效的途径。二.峰扩展和速率方程式2.速率方程式（范·弟姆特方程式）A─涡流扩散项B/u—分子扩散项C·u—传质项固定相传质原因：
进出固定相速度不同（固相，液相）
减小措施：①使用薄的固定相层
②小颗粒填料
移动相传质原因：迁移滞留
减小措施①填装均匀紧密
②使用小颗粒填料和表面
多孔性填料
.3.速率理论的要点:(3)为色谱分离和操作条件选择提供了理论指导。阐明了流速和填料对柱效及分离的影响。

选择最佳条件，才能使柱效达到最高。

4.获得高柱效的几种方法：5.影响分离的因素与提高柱效的途径
液体的扩散系数仅为气体的万分之一，在高效液相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/u较小，可忽略不计，即H=A+Cu§１－４分离度(Rs)讨论：一．分离度的数学表达式：对浓度不同组分而言：二．分离度影响因素

①峰的宽度（峰宽越小，Rs越大）
峰的宽窄主要反映了色谱分离的动力学特性
②两峰的保留时间之差（△tR越大，Rs越大）
反映了色谱分离的热力学特性

分离度基本
关系式：

四．控制分离度方法例:流动相极性变化对组分k’的影响②更换色谱柱（改变N）③改变选择性系数五.分离度控制的一般原则:第二章仪器装置
四大部件：
高压输液泵
进样器
高效分离柱
检测器

§2－1高压输液泵
作用：向色谱柱输送一个连续、恒定的移动相。
一、对泵系统的要求
1.使用方便（易调节流量、过压保护等）
2.更换洗脱液容易、死体积小
3.有最大工作压力(20MPa，130MPa)
4.一定流量范围（直径小，流量小；速度快，流
量大。）（0.1~10ml/min)
5.流量稳定性好(流量噪声、流量波动、流量漂
移）
6.流量精度高机械往复式柱塞泵的工作原理：特点：梯度淋洗装置泵系统发展趋势§2－2色谱柱柱体为直形不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm。减小填料粒度和柱径以提高柱效。柱效的影响因素§2－3进样装置§2-4检测系统
功能：连续地将色谱柱中流出的组分随时间
变化的情况，转变成大小不同的电信
号输入到记录仪中，得到色谱图。
按检测方式不同，分为：
①总体性质检测器（通用型）
示差折射检测器
②溶质性质检测器（选择型）
紫外检测器、荧光检测器、电导检测器检测器的性能指标
一个理想检测器，必须具备下列条件：
①灵敏度高
②不受温度及流动相流速变化的影响
③响应随组分量的变化而线性地变化
④稳定性好，操作方便
衡量指标：
①灵敏度S=△R/△Q
②噪音－在没有样品情况下，检测器输出的最大
振幅（温度、流量、泵）
③漂移－检测器在一段时间内，基线随时间的增
加而产生的偏离（电压、流动相）
④最小检测限－样品产生两倍于噪音信号时的
（检测下限）浓度
⑤线性范围－检测信号呈线性变化时，最大和最
小进样量之比检测器a.紫外检测器
应用最广，对大部分有机化合物有响应。
特点：b.光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器三维：光谱-色谱图第三章液固色谱和键合相色谱存在竞争吸附：吸附－解吸平衡
①溶质、流动相分子之间
②溶质中不同官能