抗恶性疟原虫特异性人源抗体Fab片段的制备和研究的任务书.docx

抗恶性疟原虫特异性人源抗体Fab片段的制备和研究的任务书
任务书
题目：抗恶性疟原虫特异性人源抗体Fab片段的制备和研究
一、研究背景和意义
恶性疟原虫是世界上最致命的寄生虫之一，每年造成数百万人的死亡。虽然氯喹等抗疟药物已经被广泛使用，但是恶性疟原虫的抗药性问题日益突出，因此开发新的治疗手段十分必要。抗体是一种可以高效识别并结合到目标蛋白上的蛋白质，因此可以作为治疗恶性疟原虫感染的重要手段。然而，全长抗体在治疗中的使用还面临一些问题，如潜在的免疫原性和过大的分子量限制了它的渗透能力。相比之下，抗体的片段Fab则可以继承完整抗体的结合特异性，但却具有更小的分子量和更低的免疫原性，因此成为重要的研究方向。
二、研究目的和内容
本研究的目的是制备并研究一种抗恶性疟原虫特异性的人源抗体Fab片段，具体包括以下内容：
1.克隆抗体基因：从恶性疟原虫感染者中筛选出特异性较高的抗体阳性细胞，获取其RNA并反转录为cDNA，在此基础上扩增出抗体的V、D、Jgene。
2.构建表达载体：利用PCR技术将V、D、Jgene重组，构建成包含人源IgG1序列的表达载体，并转化到大肠杆菌中表达。
3.Fab片段的纯化：通过亲和层析、快速溶液层析、尺寸排除层析等纯化手段获得抗体Fab片段。
4.鉴定Fab片段：进行Fab片段的SDS-PAGE、Westernblot、UV、Circulardichroism等鉴定，确定其结构和性质。
5.Fab片段作用机理：应用Fab片段进行恶性疟原虫的体内和体外作用实验，探讨Fab片段的作用机理和效果。
三、研究方法和步骤
1.克隆抗体基因：选取恶性疟原虫感染者的抗体阳性细胞，从中提取RNA，并进行反转录PCR扩增V、D、Jgene。
2.构建表达载体：将V、D、Jgene进行重组，构建成含有人源IgG1序列的表达载体，并经测序确认。
3.Fab片段的表达：将表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，并进行诱导表达，收集细胞，得到Fab片段。
4.Fab片段的纯化：利用亲和层析、快速溶液层析、尺寸排除层析等纯化手段，获得纯化的Fab片段。
5.鉴定Fab片段：进行SDS-PAGE、Westernblot、UV、Circulardichroism等鉴定，确定其结构和性质。
6.Fab片段作用机理：应用Fab片段进行恶性疟原虫的体内和体外作用实验，探讨Fab片段的作用机理和效果。
四、研究进度计划
本研究计划时间为12个月，具体任务安排如下：
第1-3个月：克隆抗体基因。
第4-6个月：构建表达载体并转化表达。
第7-9个月：Fab片段纯化及鉴定。
第10-12个月：应用Fab片段进行恶性疟原虫的体内和体外作用实验。
五、预期结果及意义
本研究预计能够成功制备一种抗恶性疟原虫特异性的人源抗体Fab片段，并探索其作用机理和效果。该片段Fab具有更小的分子量和更低的免疫原性，可以减少全长抗体的副作用，提高治疗的安全性和效果。同时，本研究的结果将为抗疟药物的研发提供新的思路和方法，具有较高的应用价值。