调控谷氨酸转运体对甲基苯丙胺致神经损伤的作用研究的任务书.docx

调控谷氨酸转运体对甲基苯丙胺致神经损伤的作用研究的任务书
任务书
任务名称：调控谷氨酸转运体对甲基苯丙胺致神经损伤的作用研究
一、任务背景和意义：
甲基苯丙胺（简称冰毒）是一种极具依赖性的药物，长期而又频繁地使用冰毒会给人体带来严重伤害，其中神经系统受到的伤害尤为严重，可以导致一系列神经疾病。本课题旨在探究谷氨酸转运体（EAATs），一种调节神经系统内谷氨酸水平的蛋白质，对于甲基苯丙胺成瘾和神经损伤的调节作用，为治疗冰毒成瘾、预防神经系统疾病等攸关人类健康的问题提供新的研究思路。
二、任务目标：
1.检测不同浓度甲基苯丙胺处理对主要EAATs基因表达的影响.
2.检测不同浓度甲基苯丙胺处理对主要EAATs蛋白表达和EAATs功能的影响.
3.检测EAATs针对甲基苯丙胺所致细胞损伤的保护作用及其机制.
三、研究内容：
1.利用PCR、Westernblot等技术检测进一步检测不同浓度甲基苯丙胺对EAATs基因和蛋白表达的调节作用.
2.利用荧光探针技术检测不同浓度甲基苯丙胺处理后EAATs功能的变化.
3.利用细胞生物学方法检测EAATs对于甲基苯丙胺所致细胞损伤的保护作用及其机制，探究其相关通路。
四、研究方法：
1.细胞共有式培养维持细胞。
2.利用甲基苯丙胺在不同时间段的处理，检测其剂量依赖性效应，最终选定适宜的处理浓度和时间。
3.通过qPCR、Westernblot、免疫印迹法、细胞毒性试验等方法检测EAATs基因和蛋白表达，EAATs功能的变化。
4.采用CLSM技术检测神经细胞活性变化。
五、任务进度及安排：
第一阶段：样品采集和前期准备
1.选取适合细胞的培养基和培养条件，并进行优化。
2.细胞处理时间及剂量优化。
3.优选采用的荧光探针及其检测方法。
4.优选相关细胞存活率和毒性评价方法。
第二阶段：DNA、蛋白质提取和分析
1.检测EAATs基因表达及变化；
2.检测EAATs蛋白表达及变化；
第三阶段：细胞生物学分析
1.检测EAATs功能及变化，并分析其与甲基苯丙胺作用的关系；
2.检测EAATs对神经细胞损伤的保护效应及其涉及的信号通路；
第四阶段：结果分析、数据处理及论文撰写。
六、任务经费：
1.实验所需试剂和材料费用；
2.实验室使用费用、场地费用、设备维护费用；
3.实验操作人员工资及保险。
七、任务人员及职责分工：
1.研究负责人：负责课题的设计和实验的指导，起草论文。
2.助理研究员：负责样品的采集、数据的记录，并进行部分实验操作。
3.实验人员一名：独立进行PCR、Westernblot、细胞毒性试验的操作并记录数据。
4.实验人员二名：独立进行细胞共有式培养维持细胞及上述荧光探针法等操作。