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17β-雌二醇对ox-LDL诱导人外周血内皮祖细胞凋亡的影响的任务书
题目：17β-雌二醇对ox-LDL诱导人外周血内皮祖细胞凋亡的影响
一、研究背景
氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）是一种主要存在于动脉粥样硬化斑块内的炎性物质，可以导致内皮细胞损伤和凋亡，是动脉粥样硬化的重要致病因素。外周血内皮祖细胞是血管内皮细胞的前体细胞，在心血管疾病的治疗中有重要的临床应用价值。17β-雌二醇是一种性激素，具有抗氧化、抗炎症、促进内皮生长等作用，有可能对ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡产生保护作用。
二、研究目的
本研究旨在探究17β-雌二醇对外周血内皮祖细胞在ox-LDL刺激下的凋亡率、凋亡相关蛋白表达以及内皮生长因子表达的影响，阐明17β-雌二醇对内皮细胞保护作用的机制。
三、研究内容和方法
1.实验设计
本实验采用细胞培养技术，将外周血内皮祖细胞分为以下5组进行处理：正常对照组、ox-LDL组、17β-雌二醇组、17β-雌二醇+ox-LDL组和ox-LDL+17β-雌二醇前处理组。对各组细胞进行观察和比较，评估17β-雌二醇对内皮细胞的保护作用。
2.实验方法
2.1培养细胞
采用外周血单个核细胞分离技术，从人类血液中获得内皮祖细胞。将细胞在37℃、5%CO2的条件下培养至细胞稳定生长状态，加入17β-雌二醇或ox-LDL进行不同组的处理。
2.2细胞形态观察
用瑞士荧光显微镜观察处理后外周血内皮祖细胞的形态变化。
2.3流式细胞术
采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。利用AnnexinV-FITC/PI染色剂检测各组细胞的凋亡水平，以比较17β-雌二醇对不同组内皮细胞凋亡的影响。
2.4免疫印迹分析
采用免疫印迹技术检测各组细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的表达情况，以了解不同组内皮细胞凋亡的机制。
2.5PCR
采用聚合酶链反应（PCR）检测各组细胞内内皮生长因子VEGF、bFGF和PDGF的相对表达水平，以比较17β-雌二醇对内皮细胞增殖的促进作用。
四、研究意义
本研究可以探讨17β-雌二醇对ox-LDL诱导内皮细胞凋亡的影响和内皮生长因子的调节作用，为心血管疾病的临床治疗提供新的思路和方法。
五、实验设计与预期结果
本实验以外周血内皮祖细胞为模型，旨在探究17β-雌二醇对ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡的保护作用及其机制。预计17β-雌二醇在多种浓度下均可显著降低ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡率，降低凋亡相关蛋白Bax和Cleaved-Caspase-3表达水平，提高Bcl-2表达水平，且能够显著上调VEGF、bFGF和PDGF的表达水平，提高内皮细胞的增殖能力。这些结果能够为心血管疾病的治疗提供新的方法和思路。