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细胞冷冻保存技术.pptx

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会计学细胞的低温保存一般在原代或传代2－10次内即大量冻存，作为原种（stockcells），取一支细胞进行传代繁殖，用毕再冻存，这样可保证长期使用和延缓衰老。非玻璃化冷冻 如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶，从而减少细胞内冰晶对细胞的损伤；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。在细胞冻存时加入冷冻保护剂，可以保护细胞免受冷冻损伤。 原理：1.常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，降低细胞的冰点 2.提高胞膜对水的通透性，促进细胞内水渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少冰晶对细胞的损伤；解冻时，促进细胞外水进入细胞内，缓解渗透性肿胀。 3.稀释细胞内外未结冰溶液中的电解质，减少溶质损伤。在培养液中添加的保护剂：冻存和复苏的原则：慢冻快融冻存培养细胞(4)冻结好的安瓿放入低温冰柜或液氮罐中。温度达-150~-190℃，细胞几乎处在停止状态。 冷冻时带手套操作，以免冻伤。 慢冻程序缓慢冷冻的简化程序解冻程序玻璃化冷冻解决办法：通过添加高浓度的冷冻保护剂，可以显著降低形成玻璃化所要求的降温速度。一般冷冻保护剂的浓度为40%-60%。 冷冻保护剂：DMSO、乙酰胺、丙二醇、聚乙二醇等。玻璃化冷冻的程序解冻程序步骤