矮牵牛酵母双杂交cDNA文库构建及RTE-like互作蛋白筛选的任务书.docx

矮牵牛酵母双杂交cDNA文库构建及RTE-like互作蛋白筛选的任务书
任务书
任务名称：矮牵牛酵母酵母双杂交cDNA文库构建及RTE-like互作蛋白筛选
任务目的：
根据科学研究需要，构建矮牵牛酵母双杂交cDNA文库，筛选其中的RTE-like互作蛋白，以深入研究矮牵牛酵母的相关生物学功能和分子机制。
任务内容：
1.矮牵牛酵母双杂交cDNA文库构建
（1）提取矮牵牛酵母总RNA，在室温下使用DNaseI进行去除基因组DNA、质粒RNA、已有mRNA等污染。
（2）合成cDNA，以oligo（dT）为引物反转录RNA为cDNA。在cDNA末端加A，并进行连接，制备大片段cDNA。将大片段cDNA使用随机引物切割为短片段cDNA。
（3）将短片段cDNA与载体pGBKT7连接，构建双杂交cDNA文库。
2.RTE-like互作蛋白筛选
（1）将pGBKT7-RTE-like质粒转化至酵母细胞株Y187中，进行克隆筛选。
（2）使用pGBKT7-RTE-like与矮牵牛酵母双杂交cDNA文库进行酵母双杂交筛选，筛选出与RTE-like相互作用的蛋白质。
（3）进行阳性蛋白的筛选、鉴定和测序，并进行生物信息学分析及进一步研究。
任务实施计划：
1.第一阶段（2周）：
矮牵牛酵母的总RNA提取并纯化，通过DNaseI处理去除基因组DNA、质粒RNA、已有mRNA等污染。
2.第二阶段（4周）：
将矮牵牛酵母的总RNA经过逆转录反应转化为cDNA，并进行连接和分切，构建双杂交cDNA文库。
3.第三阶段（4周）：
pGBKT7-RTE-like质粒在酵母细胞株Y187中进行克隆筛选；筛选并鉴定出与RTE-like相互作用的阳性蛋白，并进行测序、生物信息学分析及进一步研究。
关键技术：
1.RNA提取、纯化和DNaseI消化处理。
2.cDNA合成，连接和分切技术。
3.转化酵母细胞株，双杂交筛选技术。
4.阳性蛋白鉴定、测序、生物信息学分析及进一步研究等技术。
任务执行团队：
1、主要负责人：XXX教授
2、组员：XXXX博士后（主要参与筛选实验），XXX研究生（主要参与文库构建实验）
任务交付成果：
1.完成矮牵牛酵母双杂交cDNA文库构建及RTE-like互作蛋白筛选的实验；
2.发表论文1篇，撰写实验报告1份。