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利用酵母双杂交技术筛选与hPYGO2相互作用蛋白的中期报告
利用酵母双杂交技术筛选与hPYGO2相互作用蛋白的中期报告
1.研究背景
PYGO家族成员是早期胚胎发育和生殖细胞分化过程中关键的调节因子。PYGO蛋白可以与Wnt/β-catenin信号通路中的转录因子LEF/TCF相互作用，促进其与共激活因子的结合，从而调节正常细胞增殖和分化。本研究旨在利用酵母双杂交技术筛选与hPYGO2相互作用的蛋白，以进一步探究其在Wnt/β-catenin信号通路中的作用机制。
2.研究方法
(1)构建酵母双杂交载体。
将hPYGO2的CDS序列克隆到酵母双杂交载体pGBKT7中，作为BD域。
(2)酵母双杂交筛选
使用已构建的BD-hPYGO2载体转化酵母AH109菌株，并检验BD-hPYGO2与AD载体的耐药性。然后，将人脾组织cDNA文库克隆到AD载体中，构建AD-cDNA文库。将AD-cDNA文库转化至含有BD-hPYGO2的AH109菌株中，筛选出与hPYGO2相互作用的蛋白。
(3)测序鉴定
将筛选出的阳性克隆扩增PCR产物，进行测序鉴定，确定与hPYGO2相互作用的蛋白。
3.研究进展
经过酵母双杂交筛选，得到了20个阳性克隆。目前正在进行测序鉴定和进一步实验验证，以筛选出具有较高亲和力的hPYGO2相互作用蛋白。
4.展望
通过酵母双杂交技术筛选和鉴定与hPYGO2相互作用的蛋白，可以为我们进一步理解PYGO家族蛋白在Wnt/β-catenin信号通路中的作用机制提供重要的信息。此外，本研究的结果还可为发掘新的抗肿瘤药物靶点提供新思路。未来的工作中，我们将继续深入开展相关研究。