海洋假单胞菌来源的新型海藻糖合成酶的基因克隆、表达及性质研究的任务书.docx

海洋假单胞菌来源的新型海藻糖合成酶的基因克隆、表达及性质研究的任务书
任务书
一、任务目的
本任务旨在从海洋假单胞菌（Pseudoalteromonas）中克隆海藻糖合成酶（alginatelyase，EC4.2.2.x）基因，进一步研究其基因表达规律及酶的生化性质，为海洋生物资源开发以及海洋工业生产提供科学依据和基础研究支撑。
二、任务内容
1.从海洋假单胞菌中筛选合适的菌株，提取其基因组DNA，设计特异性引物克隆海藻糖合成酶基因；
2.构建重组表达载体，进行海藻糖合成酶基因的原核表达，纯化重组酶；
3.对纯化酶进行酶学性质的研究，测定其酶活力、酶动力学参数、温度、pH等生化性质；
4.研究海洋假单胞菌中海藻糖合成酶的基因表达规律，探究其在海洋环境中的生理功能及应用潜力。
三、任务要求
1.实验设计合理科学，方案详细可行；
2.初步筛选到合适的海洋假单胞菌菌株，DNA提取纯净，PCR扩增成功，并进行序列比对以验证所得序列的可靠性；
3.构建重组表达载体，经鉴定正确性，克隆阳性菌进行酶表达及纯化，得到理想的表达和纯化效果；
4.对纯化的酶进行一系列酶学性质分析，其中包括酶活力、酶动力学参数、温度、pH等基本生化性质的研究；
5.通过实验方法，研究海洋假单胞菌中海藻糖合成酶的基因表达规律，并进一步探究其在海洋环境中的生理功能及应用潜力。
四、预期成果
1.成功从海洋假单胞菌中克隆出海藻糖合成酶基因的全长序列并获得所需的基因表达产物；
2.确定所获得海藻糖合成酶的一系列酶学性质，包括酶活力、酶动力学参数、温度、pH等生化特性；
3.研究海洋假单胞菌中海藻糖合成酶的基因表达规律，探究其在海洋环境中的生理功能及应用潜力，并对其应用价值进行初步评价。
五、进度安排
1.第一阶段（1-2周）：菌株筛选、基因组DNA提取、克隆所需基因的PCR扩增；
2.第二阶段（2-4周）：重组载体构建、转化表达菌、重组酶表达和纯化；
3.第三阶段（2-3周）：对纯化的重组酶进行酶学性质分析，获得相关生化数据；
4.第四阶段（2-3周）：进行海洋假单胞菌中海藻糖合成酶基因的表达规律研究及基础应用价值探究，取得初步结果。
六、经费预算
1.实验用品费：20000元，其中包括PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、转化试剂盒、纯化酶试剂盒等实验材料费用；
2.仪器设备费：10000元，包括PCR仪、DNA电泳仪、蛋白质电泳仪、酶动力学分析仪等；
3.差旅费：5000元，包括参加学术会议、实验交流、出差采样等因素所需的差旅费。
七、任务负责人
单位：xx大学生物学系
负责人：张三
职称：教授
邮箱：[e-mail]
联系电话：xxxxxxxxxx