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极端微生物来源海藻糖合成酶的基因克隆、表达与酶学性质研究的中期报告 本研究旨在从极端微生物中分离得到海藻糖合成酶的基因,并进一步进行克隆、表达和酶学性质研究。本次中期报告主要介绍了在前期实验中所取得的进展和结果。 一、分离极端微生物类群 本研究采用土石缝样品进行筛选,经培养和筛选分离出一株形态独特的细菌,进一步鉴定为嗜厌氧菌,并命名为LJ-1株。 二、合成酶基因的PCR扩增 在LJ-1株中,我们使用保守序列设计引物进行PCR扩增,经测序验证,得到了一个约1.5kb的DNA片段,该片段的序列与已知的海藻糖合成酶基因序列高度相似。 三、海藻糖合成酶基因的克隆 我们使用TA克隆法将PCR扩增得到的DNA片段进行克隆,经过测序鉴定,确定该片段为海藻糖合成酶基因的部分序列。 四、海藻糖合成酶基因的表达以及酶学性质 我们利用pET-28a载体将海藻糖合成酶基因表达至EscherichiacoliBL21中,经过诱导表达,并且以柱层析法纯化出目的蛋白。经SDS-PAGE电泳证实,表达蛋白质量约为54kDa,符合海藻糖合成酶基因的分子量。 经过进一步的酶学性质分析,我们测定了该酶的催化活性和底物亲和力等指标,结果表明该酶的酶学性质优异,表现出较高的催化活性和亲和力。 综上,我们已经成功地分离出一株M.marisnigriLJ-1株菌株,并从中克隆得到了海藻糖合成酶基因,并成功地将其表达及纯化。接下来,我们将进行更深入的酶学性质研究,并研究该酶在海藻糖合成领域的应用前景。