宿主细胞microRNA库调控甲型流感病毒复制的机制研究的开题报告.docx

宿主细胞microRNA库调控甲型流感病毒复制的机制研究的开题报告
一、研究背景
甲型流感病毒是一种高变异性病毒，能够在人类、畜类和家禽中广泛传播，常常引发严重疫情。病毒的复制是依赖于宿主细胞的各种信号和调控机制，因此了解宿主细胞的调控机制对于研究甲型流感病毒的复制机制具有重要意义。
microRNA是一种重要的调控因子，是由RNA聚合酶II合成的短链非编码RNA，能够靶向特定的mRNA，调控基因的表达。前人的研究表明，宿主细胞的microRNA的水平与甲型流感病毒的复制有密切关系，但其具体的调控机制还不十分清楚。因此，本研究旨在探究宿主细胞microRNA库对甲型流感病毒复制的调控机制，为研究甲型流感病毒的复制提供理论基础和实验基础。
二、研究内容
本研究将应用小鼠肺上皮细胞（MLE-15）作为研究对象，构建宿主细胞microRNA库，利用高通量测序技术对宿主细胞中microRNA的表达进行全面分析，筛选出与甲型流感病毒复制相关的microRNA。接着，运用基因敲除技术将筛选出的关键microRNA敲除，观察对甲型流感病毒复制的影响。
在得到和确定关键microRNA之后，本研究将进一步探究这些microRNA调控甲型流感病毒复制的具体机制。采用蛋白质组学技术、RNA亲和层析技术和荧光共振能量转移技术分析关键microRNA和宿主细胞的蛋白质与RNA互作网络，解析microRNA调控甲型流感病毒复制的分子机制，为深入研究甲型流感病毒复制提供有力的分析工具和理论基础。
三、研究意义
本研究的意义在于探究宿主细胞microRNA库调控甲型流感病毒复制的机制，对于阐明病毒与宿主细胞相互作用的过程具有重要的意义。一方面，本研究可以对活化宿主细胞的免疫系统、提高宿主对病毒的抗性提供深入的理论基础和实验参考。另一方面，通过深入研究甲型流感病毒的复制机制，开展更全面、深入的抗流感药物研究，为合理治疗病毒感染提供有力支持。
四、研究方法
1.构建宿主细胞microRNA库：先从MLE-15中提取总RNA，使用miRNeasyMiniKit纯化RNA，随后使用TruSeqsmallRNASamplePrepKit建立microRNA文库。
2.高通量测序分析microRNA表达：利用IlluminaHiSeq2000测序平台对宿主细胞microRNA文库进行高通量测序，获取微小RNA各种表达差异读数以及其相应的序列信息，比对miRBase数据库进行注释和鉴定。
3.建立microRNA基因敲除模型：选择适宜的shRNA序列，并利用Lentivirus包装系统实现对关键microRNA基因敲除。
4.筛选影响甲型流感病毒复制的microRNA：以甲型流感病毒的感染为模型，获取与病毒复制相关的microRNA列表，并筛选出关键microRNA。
5.构建microRNA-target信号通路图谱：通过蛋白质组学技术、RNA亲和层析技术和荧光共振能量转移技术分析关键microRNA和宿主细胞的蛋白质与RNA互作网络，构建microRNA-target信号通路图谱。
五、研究预期结果
本研究预计能够利用高通量测序技术深入挖掘出宿主细胞microRNA库对甲型流感病毒复制的关键microRNA，同时，通过基因敲除技术和信号通路图谱构建等常规技术，将逐步揭示microRNA对甲型流感病毒复制的调控机制，为深入研究甲型流感病毒的复制机制提供有力理论和实践依据。同时，此研究的成果也将为甲型流感的预防和治疗提供新的参考和基础。