多杀性巴氏杆菌lon缺失突变株的构建及生物学特性的研究的任务书.docx

多杀性巴氏杆菌lon缺失突变株的构建及生物学特性的研究的任务书
任务书
研究题目：多杀性巴氏杆菌lon缺失突变株的构建及生物学特性的研究
研究背景：多杀性巴氏杆菌(Acinetobacterbaumannii)是一种耐药性强、致病性高的革兰氏阴性菌，常见于医院环境和患者的呼吸道、泌尿道等部位，具有很强的毒力和传染性。目前已有多项研究表明，巨单元DNA酶Lon能影响革兰氏阴性菌的细胞生长和生物学特性，然而，对于多杀性巴氏杆菌lon基因功能和生物学特性的研究还很有限。
研究内容：本研究旨在构建多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株，并对其生物学特性进行研究。
1.多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株的构建
（1）设计适当的引物，扩增lon基因上下游序列，构建重组质粒；
（2）利用双重重组技术，将重组质粒转化到多杀性巴氏杆菌中；
（3）筛选多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株，通过PCR、Western印迹、菌落PC绘图等方法验证其缺失突变。
2.多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株的生物学特性
（1）分别培养野生型和lon基因缺失突变株，比较其生长速率和生长形态等生物学特性；
（2）研究多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株对氧气、酸碱度、温度等环境因素的耐受性；
（3）研究多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株的生物膜形成、群体行为、致病性等生物学特性。
研究方法：本研究采用遗传学、分子生物学和微生物学等多种实验方法，包括PCR、Western印迹、菌落PC绘图、双重重组技术、菌落计数法、电镜观察、生物膜实验、群体行为实验和小鼠感染模型等。
研究意义：本研究将有助于深入探究巨单元DNA酶Lon对多杀性巴氏杆菌生物学特性的影响机制，为预防和治疗多杀性巴氏杆菌感染提供理论基础和新思路。同时，通过突变构建的多杀性巴氏杆菌lon缺失突变株，可以为进一步研究和应用多杀性巴氏杆菌的生物学特性、代谢途径和抗性机制提供有力的工具和平台。
研究进度计划：
第一年：
1.购置lon基因定量PCR试剂盒和多杀性巴氏杆菌基因组序列；
2.优化PCR反应体系，扩增lon基因上下游序列；
3.构建重组质粒并进行电泳纯化；
4.列入筛选lon基因缺失突变菌株所需培养基的组成和制备方法；
5.对多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株的筛选条件进行优化。
第二年：
1.通过双重重组技术构建多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株；
2.鉴定和验证多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株，包括PCR、Western印迹和菌落PC绘图等；
3.比较野生型和lon基因缺失突变株的生长速率和生长形态等生物学特性。
第三年：
1.在氧气、酸碱度、温度等不同环境条件下研究多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株的耐受性；
2.研究多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株的生物膜形成、群体行为、致病性等生物学特性；
3.建立小鼠感染模型，研究多杀性巴氏杆菌lon基因缺失突变株在体内的致病性和病理变化。
研究经费计划：本研究所需经费20万元，其中设备购置费5万元，实验材料费12万元，实验人员工资3万元。