WAVE1在儿童急性髓细胞白血病多药耐药中的作用及机制研究的任务书.docx

WAVE1在儿童急性髓细胞白血病多药耐药中的作用及机制研究的任务书
任务书
一、研究背景
急性髓细胞白血病（AcuteMyeloidLeukemia,AML）是一种由于骨髓内克隆细胞异常增殖，并抑制正常造血而引发的恶性肿瘤。在儿童中，AML较为少见，但其治疗难度较大，预后不佳。目前，AML的治疗主要是化疗，包括药物单用或联合使用。然而，由于AML的多药耐药性（MultipleDrugResistance,MDR），使得治疗的有效性大大降低，导致治疗失败和复发可能性增加。因此，新的治疗手段必须被探索。
WAVE1作为肿瘤细胞侵袭和迁移中的关键因子，已被广泛研究和确认在多种癌症中的作用。常规的治疗方法只针对癌细胞的增殖和分裂，而WAVE1的抑制可以特异性地阻止癌细胞浸润和迁移，从而引发凋亡。
目前，由于缺乏关于WAVE1在AML中的深入研究，因此需要探索WAVE1在儿童急性髓细胞白血病多药耐药中的作用及机制。
二、研究目的
本研究的目的是探究WAVE1在儿童急性髓细胞白血病多药耐药中的作用及机制，以期为AML的治疗提供新的方向和策略。
三、研究内容
1.确定WAVE1在儿童急性髓细胞白血病中的表达情况
通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和免疫印迹法检测WAVE1在儿童急性髓细胞白血病中的表达情况。
2.观察WAVE1对儿童急性髓细胞白血病药物耐药性的影响
将含WAVE1的体外过表达质粒转染至儿童急性髓细胞白血病细胞中，然后将细胞暴露于常规AML化疗药物（如阿霉素，顺铂等）并检测细胞活性。
3.探究WAVE1对儿童急性髓细胞白血病药物耐药机制的调控
通过Westernblotting和免疫印迹法检测WAVE1，P-gp和丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）的表达，研究WAVE1对P-gp和MAPK信号传导通路的调节作用，并探究其与AML多药耐药的潜在联系。
四、研究方法
1.细胞系和动物模型
使用儿童急性髓细胞白血病当选细胞系和非肿瘤细胞系（例如HEK293T）探究WAVE1的作用机制。使用小鼠模型探究WAVE1作用于AML细胞的体外活性的影响。
2.细胞活性和细胞分析
通过MTT法和流式细胞分析来确定WAVE1的调节作用对细胞增殖和细胞死亡率产生的影响。
3.制备体外过表达质粒
将WAVE1基因扩增并插入含有一定序列限制酶切位点的质粒，通过酶切和连接检测插入正确性，并进行酶解，纯化，扩增等步骤以制备体外过表达质粒。
4.转染相关细胞系
使用Lipofectamine2000工具将质粒转染到相应细胞系中。
5.分子生物学技术
包括DNA和RNA的提取，RT-PCR和qRT-PCR等制备方法，Westernblotting和免疫印迹法等方法。
五、预期成果
通过本研究，我们期望可以：
1.确定WAVE1在儿童急性髓细胞白血病中的表达情况，并观察WAVE1对药物耐药性的影响。
2.探究WAVE1的作用机制，调查其是否经由P-gp信号路径调节多药耐药。
3.为治疗儿童急性髓细胞白血病提供新的治疗方法和潜在靶点。
六、研究时间表
本研究计划为期12个月，时间表如下：
第1–3个月：文献综述和实验方案设计
第4–6个月：WAVE1在儿童急性髓细胞白血病中的表达情况和其与多药耐药性的相关性检测
第7–9个月：在相应细胞中使WAVE1过表达
第10–12个月：研究WAVE1的作用机制和其在治疗AML中的作用潜力
七、预算
本研究预计需要的资金为30万人民币，主要针对实验材料，仪器设备维护及一定人工费用。
参考文献：
1.GregoryA.Dunn,AnnetteM.Marleau,SarahR.Craddock,AlisonM.Wells.(2020)TheintracellularsignalingproteinWAVE1asapotentialtherapeutictargetformalignantgliomas:acomprehensivecriticalreview.JournalofNeuro-Oncology.146(3),307–324.
2.AlanL.Chen,XinminLi,PingZhou,JunenettePeters,JianminFang,(2020)WAVE1:rolesincancerprogression,metastasis,andimmunemicroenvironments.CancerCellInternational.20,7.