CREG调控内皮细胞周期的作用机制研究及其在小鼠下肢缺血模型中的作用的任务书.docx

CREG调控内皮细胞周期的作用机制研究及其在小鼠下肢缺血模型中的作用的任务书
一、研究背景及意义
缺血性疾病是一种常见的疾病，如下肢缺血等，在临床中非常常见。而缺血疾病的治疗具有非常大的难度，现有的治疗手段还不能够达到完全治愈的效果，因此对缺血性疾病的治疗研究有着非常重要的意义。
内皮细胞是血管内皮层中的一种细胞，其在缺血疾病的发生中具有非常关键的作用。内皮细胞在缺血状态下会发生分裂和增殖现象，从而导致血管的新生和修复。而且在内皮细胞的生长过程中，细胞周期对于细胞的分裂和增殖至关重要。
CREG是一种新的分泌型蛋白质，其在细胞生长和分化中扮演着非常重要的角色。一些研究表明，CREG在内皮细胞的生长和增殖中具有非常重要的作用。但是目前在CREG在内皮细胞中调节细胞周期的作用机制尚未清楚，因此本课题拟对这一问题进行深入的定量和定性研究。
二、研究目的和内容
本研究的目的是探究CREG在调节内皮细胞周期中的作用机制，并在小鼠下肢缺血模型中验证其作用。
具体研究内容如下：
1、将内皮细胞分为对照组和实验组，实验组内皮细胞将用CREG进行处理，对比两组细胞在细胞周期中G1、S、G2、M期所占比例的变化。
2、通过WesternBlot和实时荧光定量PCR技术探究CREG对细胞周期关键因子如CyclinD1，CDK4和p27的表达关系。并通过免疫细胞化学染色法进一步确认结果。
3、在小鼠下肢缺血模型中注入CREG，探究CREG调控内皮细胞周期的作用在小鼠下肢缺血模型中的作用机制，比较与对照组的差异。
三、研究方法
1、细胞培养和细胞处理。
2、WesternBlot和实时荧光定量PCR技术：将分离的内皮细胞在CREG处理前后分别进行提取蛋白和RNA，采用SDS-PAGE，WesternBlot和荧光定量PCR技术进行分离和检测。
3、免疫细胞化学染色法：检测内皮细胞在不同时间下细胞周期关键因子的表达变化。将处理后的细胞制成切片，在切片上进行特定抗体的检测，比较不同组别细胞周期因子的表达变化情况。
4、小鼠下肢缺血模型注入CREG：采用小鼠下肢缺血模型，在实验组中注射CREG，并与对照组进行对比观察。使用两次点阵照射法和细胞膜标记法进行检测。
四、预期成果
1、在细胞中明确CREG对于内皮细胞细胞周期的调控作用机制。
2、通过WesternBlot和实时荧光定量PCR技术大量采用数据进行统计分析。免疫细胞化学染色法更直观地展示所得数据。
3、明确CREG在小鼠下肢缺血模型中的作用，为今后的临床治疗提供依据。
五、研究难点
本研究的难点主要是CREG在内皮细胞周期中的作用机制不清楚，可能会在研究中出现一些意料之外的结果，因此该课题需要在不断探索与改进中不断验证研究成果，确定一种更合适的分析策略，确保结果的可靠性和准确性。此外，在小鼠缺血模型下注入CREG，用作对照组的小鼠缺血模型的一些非损伤因素介入控制也会是该研究中的难点之一。
六、进展和安排
预计完成时间：2022年6月
第一阶段：2021年10月-2022年2月。完成细胞培养和处理、分离RNA和蛋白质、采用西方印迹和实时荧光定量PCR技术进行分离和检测。
第二阶段：2022年2月-2022年4月。完成免疫细胞化学染色法检测。
第三阶段：2022年4月-2022年6月。完成小鼠的下肢缺血模型注入，比较实验组和对照组的差异，并对研究成果进行数据分析和总结。
七、参考文献
1.LeeSH,LeeYJ,SongCH,AhnYM,KimSK,KimJG,etal.CREG1enhancesp16INK4aexpressiontopromotecellularsenescenceinhumanhepatocellularcarcinomacells.CancerLett.2017;406:9–16.
2.ZhangX,YuanX,ZhuW,QiaoS.CREG1promotestheproliferationanddifferentiationofosteoblastsbyregulatingtheNF-κBandWnt/β-cateninsignalingpathways.EurJPharmacol.2017;799:116–25.
3.LuZ,QiF,XuZ,ZhaoY,YaoY,ZhouS.CorrelationofCREG1expressionwithliverhistologicscoringinhepatitisB-relatedlivertransplantation.CellBiochemBiophys.2014;70:1819–28.