人FcγRⅠ的原核表达、真核表达及线性结合表位的初步鉴定的任务书.docx

人FcγRⅠ的原核表达、真核表达及线性结合表位的初步鉴定的任务书
任务书
1.背景和意义
FcγR（Fcgammareceptor）是一种特殊的受体，它是免疫细胞表面的一种膜蛋白，可以结合到IgG抗体，并在此基础上促进免疫细胞杀伤病原体和癌细胞等。FcγR的结合和功能与其在细胞膜上的表达关系密切。因此，对FcγR在原核和真核表达的鉴定和表位的研究，能够深入探究FcγR的结构和功能，为细胞免疫学的研究提供有效的手段和理论指导。
2.研究目的
本项目旨在从以下几个方面进行研究：
1)构建适合原核表达FcγRⅠ的载体，并利用大肠杆菌等细菌进行原核表达，并检测表达效果和纯度。
2）基于FcγRⅠ的序列信息，利用目标基因克隆法构建FcγRⅠ真核表达载体，并转染至CHO细胞株中，实现真核表达，并检测表达的纯度和表达效果。
3）采用线性和非线性的表位识别方法，预测FcγRⅠ可能的结合表位，并进行初步的结合实验。
3.研究内容
1)建立适合原核表达FcγRⅠ的载体，并进行原核表达试验
通过分析FcγRⅠ序列的物理化学特性和生物学功能，设计T7promoter上游引物和下游引物，克隆得到相应的表达载体，并转化至大肠杆菌等原核表达体中。
通过Westernblot等蛋白质检测方法进行表达效果和纯度的分析。
2）构建FcγRⅠ真核表达载体，进行真核表达试验并检测表达效果
利用FcγRⅠ的序列信息设计合适的表达载体，并利用转染技术将重组质粒导入CHO细胞株中，实现FcγRⅠ的真核表达。
通过Westernblot等蛋白质检测方法进行表达效果和纯度的分析。
3）基于已知FcγR的线性和非线性表位识别方法，预测FcγRⅠ源于其序列特征的线性结合表位，并进行初始的结合实验
使用ELISA等方法进行FcγRⅠ和IgG的结合实验，并确定初始的结合表位。
4.研究要求
1)认真阅读FcγR相关文献，深入理解FcγR的结构和功能。
2)熟悉PCR、克隆、转染和细胞培养等实验技术，并具备相关实验经验。
3)熟悉Westernblot、蛋白质计量和实验数据处理等技术。
4)具备扎实的基础理论知识和实验操作技能，保证实验的准确性和可重复性。
5)能够认真分析实验数据，撰写清晰、准确、规范的实验报告。
5.预期成果
1）成功构建适合原核表达FcγRⅠ的载体，并获得较高的表达效果和纯度，为制备FcγRⅠ的免疫抗原提供有效工具。
2）构建FcγRⅠ真核表达载体，并实现FcγRⅠ在CHO细胞中的表达，为深入研究FcγR在细胞膜上的定位和活性提供重要基础。
3）通过预测和实验验证方法初步确定FcγRⅠ可能的结合表位，为深入探究FcγR的结构和功能提供有效的线索。
6.研究时间
本研究计划为期一年，具体的研究时间需要按照实际情况进行适当调整。
7.参考文献
1.NimmerjahnF,RavetchJV.Fcγreceptorsasregulatorsofimmuneresponses.NatRevImmunol,2008,8:34–47.
2.BruhnsP,IannascoliB,EnglandP,etal.SpecificityandaffinityofhumanFcγreceptorsandtheirpolymorphicvariantsforhumanIgGsubclasses.Blood,2009,113:3716–3725.
3.WinesBD,VandervenHA,EsparonSE,etal.DimericFcγRectodomainsdetectpathogenicinfluenzaviruswithhighaffinity.JVirol,2016,90:5989–5995.
4.CookEM,LindorferMA,vanderHorstH,etal.Antibodiesthatefficientlyformimmunecomplexeswithsolubleratherthanmembrane-associatedantigensactivatecomplementmorereadilyandinducegreaterB-cellactivation.MolImmunol,2016,76:44–54.