家蚕乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中的表达与表面展示研究的任务书.docx

家蚕乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中的表达与表面展示研究的任务书
任务书
题目：家蚕乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中的表达与表面展示研究
背景和意义：
乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）是可逆性酯酶的一种，广泛分布于动物和植物的神经和非神经组织中，负责降解乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）这一神经递质。在生物体内，AChE还具有维持胆碱水平平衡、调节神经系统功能、有机磷农药中毒治疗等重要生理、药理学作用。
酵母毛发菌属（Malasseziaspp.），也称毕赤酵母属，是一类皮脂真菌，分布于哺乳动物的皮肤上，包括人类。尽管毕赤酵母在皮肤上是共生菌群之一，但在某些情况下会引起皮肤病，如脂溢性皮炎、毛囊炎等。因此，研究毕赤酵母生物学特性及其相关分子机制具有重要意义。
近年来，研究者发现，有关AChE基因在毕赤酵母基因组中存在，并且在毕赤酵母菌落生长过程中起着重要作用。鉴于此，我们深入研究AChE基因在毕赤酵母中的表达与表面展示机制，将有助于深入理解该酿母对宿主的共生关系。
任务要求：
1.构建pMAL-c5x-AChE载体。以家蚕AChE的基因序列为模板，克隆其编码片段；将其插入pMAL-c5x载体，并构建pMAL-c5x-AChE重组质粒。
2.确定pMAL-c5x-AChE重组质粒的正向克隆子。通过限制性酶切、PCR扩增等技术方法，鉴定pMAL-c5x-AChE重组质粒是否正确克隆。
3.分别将pMAL-c5x与pMAL-c5x-AChE重组质粒转化到毕赤酵母中。通过蛋白印迹法、免疫荧光法等技术检测，鉴定哪个载体更适合在毕赤酵母中产生表达AChE的融合蛋白。
4.筛选得到在毕赤酵母中高效表达AChE的重组菌株。通过平板筛选法，筛选表达AChE融合蛋白的毕赤酵母菌株。
5.通过荧光显微镜等技术确定AChE融合蛋白的表面展示能力。观察AChE融合蛋白是否能够表面展示并表达出其功能性结构域。
6.对所得结果进行数据分析和统计。将所得数据绘制成图表，进行数据分析和统计，并对实验结果进行解释和论述。
7.撰写实验报告。以科学性、条理性、准确性和规范性为原则，撰写实验报告。实验报告应该包括题目、摘要、绪论、材料与方法、结果与分析、讨论和结论、参考文献等部分。
可行性分析：
1.实验所需的家蚕AChE基因序列、pMAL-c5x载体、毕赤酵母菌株可通过现有的研究文献和相关数据库获取。
2.实验所用的转化、培育、诱导表达、酵母表面展示等技术均已成熟，并有成文的实验方法和标准操作流程可供参考。
3.实验需要的基础设施和实验器材设备可在实验室内完成。
4.实验内容涉及到分子生物学、微生物学、生物化学、细胞生物学等多个学科领域，有助于拓展实验者在多学科领域的综合知识和科研能力。
5.通过在毕赤酵母中表达和表面展示家蚕AChE，有助于深入探究其在毕赤酵母与宿主之间的生物学作用机制，并为防治皮肤疾病提供科学依据和指导。
参考文献：
1.AronsonN.N.(1982).Acetylcholinesterase:I.Structure-activityrelationshipsandpharmacologicalprofiles.CRCCritRevToxicol10,179–216.
2.ShapiroR.A,CowenL.E.(1994).TheexpressionofgenesencodingAChEinyeast:Differencesinenzymeproductionandsecretion.Yeast10,1597–1608.
3.BadaliH,BonifazA,Barrón-TapiaT.(2008).Malasseziaspp.otherthanM.globosacolonizinghumanskin.JMycology17,69–75.
4.Quintas-GranadosL.I,PicazoO,Zafra-RuizM.F,García-GranadosA,PueyoC.(2002).FusiontotheSalmonellatyphimuriumcarrierproteinimprovestheefficacyofexpression,secretion,andimmunogenicityofBacillusanthracisprotectiveantigen.InfectImmun70,5091–5097.