质粒的提取和电泳.pptx

会计学如何鉴定平板上的菌落为含有重组质粒的菌落？小量制备质粒和电泳分析质粒……1)培养细菌使质粒扩增；
2)收集裂解细菌；
3)分离纯化质粒DNA。质粒DNA与基因组DNA的区别提取的质粒的方法：1)细胞悬浮液（溶液I）--悬浮菌体
50mmol/L葡萄糖
25mmol/LTris.HclPH8.0
10mmol/LEDTA.Na2PH8.0

2)细菌裂解液（溶液II）--裂解菌体
0.2mol/LNaOH
1%SDS
3）中和液（溶液III）----中和NaOH
60ml5mol/L醋酸钾
11.5ml冰醋酸
28.5ml水

4）20mg/mlRNase----降解细菌RNA
工作浓度30～50g/ml
其他试剂作用和成分同实验一。（去除蛋白质）
（4）将上清移至另一离心管中(注意不要混入白色沉淀物)，加入等体积的TE饱和的酚/氯仿/异戊醇(25：24:1)混和液，振荡混匀1min，12,000转/分离心5min。
（5）将上层水相移至另一离心管中，加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1)溶液，振荡混匀1min，12,000转/分离心5min。
（沉淀DNA）
（6）将上层水相移至另一离心管中，加入2.5倍体积的无水乙醇，置-20℃沉淀10－15min。
（7）12,000转/分离心5min。
弃上清，室温干燥质粒DNA5-10min。
（去除RNA）
（8）用20l含RNase的水溶解质粒DNA，
轻轻吹打混合。37℃保温10min重组质粒的鉴定质粒的电泳4.ＰCR产物与T载体连接（1）基因组DNA提取、酶切、电泳（3）PCR及电泳分析（4）T-A连接、转化分析自己小组的实验结果，有时失败的经历更重要！祝同学们下午考试中取得好成绩！！！感谢您的观看！