线粒体缺陷对白念珠菌感染小鼠肠道及肠道菌群微生态的影响研究的开题报告.docx

线粒体缺陷对白念珠菌感染小鼠肠道及肠道菌群微生态的影响研究的开题报告
一、研究背景及意义
白念珠菌是一种常见的人体真菌病原体，广泛分布于环境中。该菌在人体内主要定植于口腔、消化道、生殖道等部位，对人类健康构成潜在危害。近年来，随着抗生素的广泛使用和某些人群免疫力下降，白念珠菌感染的发病率不断上升，因此引起人们的关注。
线粒体是细胞内的一个重要细胞器，参与细胞代谢和能量供应，同时在对抗病原菌的免疫应答中也起到了关键作用。前研究表明，线粒体缺陷可能成为细胞清除白念珠菌的重要因素之一。但是，关于线粒体缺陷如何影响小鼠肠道白念珠菌定植和肠道菌群微生态的研究还较为有限。因此，本研究将针对线粒体缺陷小鼠肠道环境，探究其对白念珠菌肠道定植及肠道菌群微生态的影响，并为进一步理解线粒体在肠道菌群微生态调节中的作用提供重要参考。
二、研究内容和目标
1.研究内容
本研究将通过建立线粒体缺陷小鼠模型，分析其肠道环境中白念珠菌的定植情况及肠道菌群的变化情况，进一步探究肠道内白念珠菌的定植与线粒体缺陷之间的关联性，以期为解析线粒体缺陷对肠道菌群微生态的影响提供实验基础。
2.研究目标
(1)构建线粒体缺陷小鼠模型，通过检测小鼠线粒体DNA拷贝数及线粒体呼吸链复合酶活性的变化，验证线粒体缺陷模型的有效性。
(2)检测线粒体缺陷小鼠肠道内白念珠菌的定植情况，并与野生型小鼠进行比较。
(3)考察线粒体缺陷对小鼠肠道菌群的影响，通过扩增子测序技术分析肠道菌群组成的变化情况。
(4)进一步探究白念珠菌的定植与线粒体缺陷之间的关联性。
三、研究方法及技术路线
1.分析小鼠线粒体缺陷模型的有效性
选用Pnpt1floxed-Cre小鼠作为线粒体缺陷小鼠模型，采用实时荧光定量PCR及细胞色素C氧化酶活性测定等方法检测小鼠肝脏线粒体DNA拷贝数和线粒体呼吸链复合酶活性的变化情况，验证模型的有效性。
2.检测小鼠肠道白念珠菌定植情况
将线粒体缺陷小鼠和野生型小鼠放养于相同环境下，并采用肠道灌流法采集小鼠肠道内容物。采用定量PCR的方法检测肠道内白念珠菌的定植情况。
3.扩增子测序分析肠道菌群组成的变化情况
从小鼠肠道内容物中提取总DNA，采用扩增子测序技术分析肠道菌群组成的变化情况。利用高通量测序技术，对肠道菌群的16SrRNA进行扩增，并得到PCR产物的序列，进一步分析菌群组成和结构的变化。
4.探究白念珠菌的定植与线粒体缺陷之间的关联性
采用荧光原位杂交技术和组织学技术，观察白念珠菌与肠道线粒体的关联性，进一步探究白念珠菌在线粒体缺陷背景下的定植机制。
四、预期研究结果及意义
本研究将通过建立线粒体缺陷小鼠模型，对于探究线粒体缺陷与小鼠肠道中白念珠菌定植以及肠道菌群微生态的关联性提供重要实验基础。预计得到如下研究结果：
(1)构建线粒体缺陷小鼠模型，验证模型的有效性。
(2)发现线粒体缺陷小鼠肠道内白念珠菌定植增多，并导致肠道菌群结构的变化。
(3)揭示了白念珠菌在肠道内与线粒体的关联性。
(4)为进一步理解线粒体在调节肠道微生态中的作用提供实验依据，为探究抗菌免疫治疗策略提供了基础数据，也为寻找肠道微生态调节相关药物提供了实验支持。