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高原鼢鼠和甘肃鼢鼠MDM2转录调节及p53甲基化分析的开题报告
一、研究背景
MDM2是一个重要的负调节因子，在细胞增殖、凋亡和DNA损伤反应中发挥着重要的作用。MDM2通过和p53蛋白相互作用，抑制p53的转录活性，从而阻止细胞周期中细胞周期可控性的关键步骤的执行。高原鼢鼠和甘肃鼢鼠是两种具有典型高山生境适应特征的啮齿动物，它们的适应机制和分子基础研究具有重要的科学价值。
二、研究目的
本研究的目的是探究高原鼢鼠和甘肃鼢鼠MDM2的转录调节和p53的甲基化水平，并探讨它们在适应高山自然环境中的作用。
三、研究内容
1.高原鼢鼠和甘肃鼢鼠MDM2基因的克隆及序列分析：采用RT-PCR技术对高原鼢鼠和甘肃鼢鼠MDM2基因进行克隆，并进行基因序列比对和分析。
2.MDM2的转录调节：分别从高原鼢鼠和甘肃鼢鼠的肺组织中提取总RNA，利用逆转录PCR扩增MDM2mRNA，并利用荧光定量PCR分析其在不同组织中的表达水平。
3.p53甲基化水平分析：采用蛋白质抽提、免疫印迹(westernblot)和甲基化特异性PCR等技术，分析高原鼢鼠和甘肃鼢鼠p53的甲基化水平和表达水平。
四、研究意义
本研究的结果将有助于揭示高原鼢鼠和甘肃鼢鼠适应高山自然环境的分子机制，为揭示动物的适应机制和进化规律提供科学依据，也为人类在高海拔和极端自然环境下的生命活动提供参考和启示。
五、研究难点
1.高原鼢鼠和甘肃鼢鼠MDM2的基因克隆及序列比对和分析。
2.根据野生动物的特点进行样品采集和快速保存。
3.蛋白质抽提的重复性和精确度控制。
六、研究方法和技术路线
Samplecollection
RNAisolationandcDNAsynthesis
MDM2genecloningandsequenceanalysis
PCRamplificationofMDM2mRNAandRT-qPCRanalysis
Proteinextractionandwesternblotting
Methylation-specificPCRanalysis
七、研究进度安排
月份|研究任务
第一阶段(1-3月)|1.动物样品采集和保存；2.总RNA提取及cDNA合成；3.MDM2基因的克隆和序列分析
第二阶段(4-6月)|1.逆转录PCR扩增MDM2mRNA；2.荧光定量PCR分析MDM2mRNA表达
第三阶段(7-9月)|1.蛋白质抽提和westernblotting分析；2.实验数据的统计和分析
第四阶段(10-12月)|1.甲基化特异性PCR分析；2.数据处理和结果的撰写和报告
八、研究经费预算
本研究所需经费：25万
设备费（含耗材）：12万
实验动物养殖费：3万
人员经费：8万(研究生2人、技术人员1人、导师1人)
其他费用（如差旅）：2万
九、研究成果和预期目标
1.取得高原鼢鼠和甘肃鼢鼠MDM2基因的克隆和序列信息。
2.探究高原鼢鼠和甘肃鼢鼠MDM2和p53在特定环境中的转录调节和甲基化水平。
3.对高山自然环境适应的分子基础进行深入解析。
4.提高对高山动物保护与可持续利用的认识。