酵母双杂交系统筛选人DND1相互作用蛋白的中期报告.docx

酵母双杂交系统筛选人DND1相互作用蛋白的中期报告
酵母双杂交系统是一种常用的蛋白质相互作用筛选技术。在本次实验中，我们使用酵母双杂交系统筛选与人DND1相互作用的蛋白。
实验过程如下：
1.构建人DND1靶标和酵母双杂交系统载体pGBKT7和pGADT7的克隆。将人DND1cDNA片段插入载体pGBKT7中，构建诱饵载体pGBKT7-DND1；将人DND1cDNA片段插入载体pGADT7中，构建靶标载体pGADT7-DND1。
2.将诱饵载体pGBKT7-DND1转化入酵母菌株Y2，并进行酵母单杂交鉴定，确保诱饵载体转化酵母株具有生长和选择标记物（Trp、Ade、His）表达。并证实DND1不对酵母生长抑制或激活。
3.将靶标载体pGADT7-DND1和酵母菌株Y187同时转化入已转化诱饵载体pGBKT7-DND1的酵母菌株Y2中，形成双杂交酵母。
4.对双杂交酵母进行生长选择和掩体筛选。在含有AureobasidinA、Trp、Leu、His、Ade掩体的培养基中筛选。
5.对生长正常、掩体阳性的克隆进行PCR扩增，鉴定是否合成了目标插入。
6.对鉴定合成的克隆进行测序分析，寻找与人DND1相互作用的蛋白。
目前，我们已经完成了上述步骤，并成功得到了生长正常、掩体阳性的克隆。接下来，我们将对鉴定合成的克隆进行测序分析，并分析筛选出的蛋白与DND1的相互作用关系。
总体来说，本次实验顺利进行，结果良好。未来，我们将继续深入探究DND1与其相互作用蛋白在细胞生物学、分子生物学等方面的研究。