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泛素和转铁蛋白受体表达载体的构建、表达和鉴定的中期报告.docx

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泛素和转铁蛋白受体表达载体的构建、表达和鉴定的中期报告 介绍 本次中期报告介绍了泛素和转铁蛋白受体表达载体的构建、表达和鉴定情况。我作为项目成员之一，负责了部分实验操作和数据分析。以下将具体介绍。 构建泛素表达载体 首先，我们使用PCR技术扩增了泛素的编码序列，并将其克隆到pET28a载体中。接着，我们将正确的克隆子进行鉴定，使用限制酶切和测序确认插入序列正确无误。 表达泛素并进行纯化 构建后的表达载体转化到大肠杆菌表达菌株中，利用IPTG诱导表达泛素蛋白。通过SDS-PAGE技术，我们检测到了目标蛋白的表达情况，并通过尿素和磷酸盐缓冲液进行了纯化。 构建转铁蛋白受体表达载体 我们同样使用PCR技术扩增了转铁蛋白受体的编码序列，并将其克隆到pET28a载体中。然后，我们将正向克隆子进行鉴定，通过测序确认插入序列正确无误。 表达转铁蛋白受体并进行纯化 将构建好的表达载体转化到大肠杆菌表达菌株中，使用IPTG诱导表达转铁蛋白受体蛋白。通过SDS-PAGE技术，我们检测到了目标蛋白的表达情况，并使用亲和柱进行了纯化。 鉴定蛋白 我们对表达和纯化后的泛素和转铁蛋白受体进行了Westernblot和质谱分析，证实它们为目标蛋白并具有良好的纯度和鉴定结果。 结论 通过以上实验操作和数据分析，我们成功构建了泛素和转铁蛋白受体表达载体，并进行了表达和纯化。这为后续研究提供了可靠的基础。