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Bcr启动子驱动EGFP表达转基因小鼠的制备和初步鉴定的综述报告 Bcr启动子驱动EGFP表达转基因小鼠是一种常用于研究神经元活动和神经系统发育的动物模型。本文将综述该转基因小鼠的制备方法及其初步鉴定情况。 1.转基因小鼠的制备方法 (1)Bcr启动子片段的选择与克隆 Bcr启动子片段是一个约3kb长的启动子序列,位于鼠基因组上的位置为chr13:54,252,632-54,255,343。研究者可以从GenBank或Ensembl数据库中获取该片段的序列,然后利用PCR技术扩增出该片段。接着,将其克隆进入一个适当的载体中,如pEGFP、pGFP或pIRES2-EGFP等,以得到Bcr启动子驱动EGFP表达的转基因载体。 (2)转基因小鼠的制备 为制备Bcr启动子驱动EGFP表达的转基因小鼠,研究者需要利用微注射技术将得到的转基因载体导入受精卵的细胞质中。通常,使用C57BL/6J品系的受精卵,并将其移入含有PBS、HEPES和BSA的滴定水中以保持温度。然后,将载体注入受精卵的细胞质中,再将其植入雌性实验动物体内,等待其产下转基因小鼠。 2.转基因小鼠的初步鉴定 (1)DNA筛查 为了鉴定是否成功制备了含有Bcr启动子驱动EGFP表达基因的转基因小鼠,研究者可以对新出生的小鼠进行DNA筛查。DNA筛查通常采用PCR技术,以检测小鼠细胞中是否含有EGFP基因。PCR扩增产物可以通过凝胶电泳进行分析,以确定是否成功制备了转基因小鼠。 (2)组织学检测 为了进一步确定EGFP基因是否真正在小鼠体内表达,研究者可以通过荧光显微镜观察小鼠组织切片的形态和荧光信号。组织检测通常需要对小鼠进行心脏灌注,并对组织进行固定、切片和染色。然后,利用荧光显微镜观察EGFP的信号是否在小鼠体内表达。 (3)行为学检测 Bcr启动子驱动EGFP表达转基因小鼠通常用于研究神经系统发育和神经元活动。为了确定转基因小鼠是否适合该研究,研究者可以进行行为学检测,比较其与野生型小鼠在行为表现上的差异。行为学检测通常包括Y迷宫、开放场和动态物体跟踪等实验。 3.结论 总之,Bcr启动子驱动EGFP表达转基因小鼠是一种可用于研究神经元活动和神经系统发育的动物模型。该转基因小鼠的制备方法包括选择Bcr启动子片段并将其克隆进入载体中,再利用微注射技术将载体导入受精卵中制备转基因小鼠。转基因小鼠的初步鉴定通常包括DNA筛查、组织学检测和行为学实验等。这些方法能够有效地鉴定出是否成功制备了含有Bcr启动子驱动EGFP表达基因的转基因小鼠,以及该转基因小鼠是否适用于神经科学研究。