重组大肠杆菌酶法催化产谷胱甘肽的中期报告.docx

重组大肠杆菌酶法催化产谷胱甘肽的中期报告
本次重组大肠杆菌酶法催化产谷胱甘肽的中期报告主要介绍了实验设计、实验步骤、实验结果和讨论。
一、实验设计
1.1实验目的
本次实验的目的是利用重组大肠杆菌酶法催化产谷胱甘肽，并探究反应条件对产率的影响。
1.2实验步骤
(1)构建重组大肠杆菌，表达谷胱甘肽合成酶。
(2)制备大肠杆菌细胞裂解液。
(3)纯化重组酶。
(4)确定反应条件。
(5)进行催化反应并检测产物。
1.3预期结果
预计能够成功利用重组大肠杆菌酶法催化产谷胱甘肽，同时也能够探究反应条件对产率的影响。
二、实验步骤
2.1构建重组大肠杆菌
按照基因序列设计构建原核表达载体，并用化学转化法将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α中，最终得到表达谷胱甘肽合成酶的重组大肠杆菌。
2.2制备大肠杆菌细胞裂解液
在摇床上培养大肠杆菌，获得细胞，然后通过紫外线吸收法破裂细胞获得细胞裂解液。
2.3纯化重组酶
将细胞裂解液通过离心的方式除去细胞碎片等杂质，再通过离子交换色谱柱等纯化手段得到多肽酶。
2.4确定反应条件
分别考虑不同pH值、不同温度、不同底物浓度以及不同酶浓度等反应条件的影响，选择最优条件进行催化反应。
2.5进行催化反应并检测产物
将待转化的底物添加到反应系统中，在最优反应条件下进行反应，待反应结束后，利用高效液相色谱法等检测手段检测产物。
三、实验结果
在重组大肠杆菌酶催化下，我们成功地合成了谷胱甘肽，并得到了较高的产率。
四、讨论
通过实验我们也发现，在不同pH值、不同温度、不同底物浓度以及不同酶浓度等反应条件下，谷胱甘肽的产率有所不同。未来我们需要进一步探究影响产率的因素，以提高反应效率。