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农杆菌介导的深黄伞形霉遗传转化体系的构建的综述报告
引言：
农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）是一种常见的土壤细菌，多数情况下与植物发生的关系是一种病理作用，比如会感染植物导致植物细胞癌症等疾病。但是，在某些情况下，这种病原体竟然可以被应用于农业生产中的遗传转化技术中。这就是农杆菌介导的深黄伞形霉遗传转化体系，该技术可以通过利用农杆菌的天然遗传转化机制，将外源DNA插入到目标真菌中，从而实现真菌的遗传转化。
构建农杆菌介导的深黄伞形霉遗传转化体系：
1.农杆菌的选择：不同的农杆菌对不同的真菌具有不同的转化效率和特异性，因此，在选择农杆菌时，需要选择与目标真菌相容性良好并且具有高效转化能力的菌株。
2.模板DNA的准备：如要将某个基因片段或基因的编码区序列插入到目标真菌的基因组中，则必须准备含有该片段的DNA，通常是通过PCR技术扩增得到。此外，为了确保转化成功率，经过限制性内切酶切割后的DNA应该摆放在合适的载体上。
3.构建转化载体：选择经过广泛应用的转化载体，如二元载体或多元载体等。该载体应包含带有5’和3’跨越片段的插入点，还需要有一定数量的序列，包括启动子、终止子和选择标记，以确保成功插入目标基因。
转化优化：
1.感染时期的优化：感染时间是非常重要的，直接影响转化效率。通常，在真菌突变体中的感染效果更好，因为真菌对农杆菌产生快速反应。另外，当目标真菌处于生长阶段时，其细胞壁破损比较容易，也更容易发生真菌转化过程。
2.转化体系的选择：在农杆菌介导的真菌转化中，化学诱导剂可以显著提高真菌的转化效率。例如，可以通过PEG或氯化钙等物质增加真菌的感染量和转化效率。此外，光刺激在一定程度上也会增强农杆菌介导的转化效果。
3.合适的选择标记：选择标记通常是用来标记成功转化的真菌，其中最常用的标记是抗生素耐受基因，如脱氧里氨基二糖（hygromycinB）和金霉素（genticin），此外，在一些非耗散性选择标记中，如五氯酚铵（PCP）或抗加克宁（Kanamycin）等，通过逆转录酶-聚合酶链式反应，选标标记将被检测出来，从而实现转化水平的定量。
结论：
近年来，农杆菌介导的真菌转化技术不断发展，也引起了越来越多生物学家的注意。该技术的实用性和可重复性正在被研究人员广泛认可，并在多种真菌中得到成功应用。通过不断探索和优化该技术，其潜在应用领域将会更加广阔。