GFP蛋白的表达分离与纯化.pptx

会计学课堂提问——每人2-3个问题；权重：30%
总结报告——PPT，5人一组，10分钟；权重：30%
实验报告——权重：40%
要求：标准的论文格式：中、英文标题和摘要；前言；材料与方法；结果；讨论；参考文献。Day0:准备实验材料
Day1:GFP表达质粒的提取；Top10感受态细胞的制备；GFP表达质粒转化Top10。
Day2:GFP表达菌株扩大培养；GFP的诱导表达。
Day3:表达菌株的收集、破碎；硫酸铵沉淀所用浓度的确定；硫酸铵沉淀GFP；疏水层析。
Day4:离子交换层析；透析；凝胶过滤层析。
Day5:SDS-PAGE；染色；脱色，观察结果。
记得带照相机！
鸣谢：
生命学院生物科学104班
邹兵周嘉赵琅
李运彰汪源
///原核：
真核：Yeast
Insect
mammals//Vector:pETseries,pGEXseries,gatewayseries,
pMAL,pTWINI,pETDuet,et.al.
////BL21(DE3),BL21(DE3,pLysS),Origami,Rosetta,Rosetta-gami
Top10,HB101,C41/C43能否用BL21(DE3)表达pGLO？
能否用Top10表达pET32a？，加入诱导剂；
，收获菌体；

诱导剂用量
IPTG:0.2mM;0.5mM;1mM
诱导温度
20℃；25/28℃；37℃//如何留样能在一张SDS-PAGE胶图中(10-12wells)体现诱导的效果、(NH4)2SO4粗分离效果、疏水层析纯化效果、离子交换层析纯化效果、凝胶过滤层析纯化效果？/HIC//////IEC///GFC//样品体积对分辨率的影响//