疏水蛋白与生物活性肽的融合表达及其性质的研究的中期报告.docx

疏水蛋白与生物活性肽的融合表达及其性质的研究的中期报告
中期报告
一、研究背景
疏水蛋白是一种具有表面亲水性和内部亲疏水性的蛋白质，能够稳定蛋白质的结构和功能。生物活性肽具有生物活性，如抗菌、抗病毒、抗氧化等，可以应用于食品、医药、化妆品等领域。将疏水蛋白与生物活性肽融合表达，可以提高生物活性肽的稳定性和可溶性。本研究旨在构建疏水蛋白与生物活性肽的融合表达系统，并对其性质进行研究。
二、研究内容
1.获得目标基因序列：设计人工基因，包含疏水蛋白和生物活性肽的序列，并将其合成。
2.构建融合表达载体：将目标基因插入到pET-28a(+)载体中。
3.诱导表达：将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，并进行IPTG诱导表达。
4.纯化融合蛋白：利用His-Tag纯化融合蛋白，并进行SDS-PAGE分析。
5.测定抗菌活性：采用纸片扩散法测定融合蛋白的抗菌活性。
三、研究进展
1.成功获得了目标基因序列，长度为705bp。
2.进行PCR扩增和酶切，成功将目标基因插入到了pET-28a(+)载体中。
3.进行SDS-PAGE分析，发现融合蛋白在可溶性表达条件下成功表达，分子量约为30kDa。
4.进行His-Tag纯化，利用葡萄糖酸钠溶液进行洗脱，得到了高纯度的融合蛋白。
5.进行纸片扩散法测定融合蛋白的抗菌活性，结果显示融合蛋白对大肠杆菌具有一定的抗菌活性。
四、下一步工作计划
1.进行质粒测序，确认目标基因是否成功插入到载体中。
2.进一步优化诱导表达条件，提高融合蛋白的产量。
3.测定融合蛋白的氨基酸序列和分子量，验证其与设计序列的一致性。
4.进一步优化纯化条件，提高融合蛋白的纯度和产量。
5.实验室内外测试融合蛋白的活性和稳定性，评估其应用前景。