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伤寒沙门菌malS-5’UTR的鉴定及功能研究的中期报告 背景: 伤寒沙门菌(Salmonellatyphi)是引起伤寒的病原体,全球每年有1000万人感染,造成数万人死亡。其耐药性不断变强,已经成为公共卫生问题。破译伤寒沙门菌基因组为深入研究其致病机制提供了基础。然而,由于具有高度变异性和可塑性,其基因表达机制并没有完全被解析清楚。其中5'UTR可以影响mRNA的真正起始位点选择和翻译起始。同源分析提示malS-malECDoperon在Salmonellatyphi有9.43%变异性,但其与代谢途径有密切关系,特别是甘露糖代谢和转运方面。本实验拟建立研究伤寒沙门菌基因表达调控的新途径,选取该区域作为切入点探究其可能的功能。 研究方法: 1.鉴定Salmonellatyphi中malS-5'UTR全序列 2.构建创建2种重组质粒pMAL-s和pBBR-s,分别带有5'UTR-malS和无5'UTR-malS,用于酶活性实验。 3.质粒转化到E.coliBL21(DE3)中,分别在甘露糖和葡萄糖作为碳源的条件下分析酶活性变化。 4.在最近的实验室会议上,讨论了目前研究的状况以及下一步的实验计划。 研究结果: 1.成功鉴定了Salmonellatyphi的malS-5'UTR全序列。 2.构建了pMAL-s和pBBR-s两种重组质粒。 3.酶活性实验结果表明,在甘露糖作为碳源时,带有5'UTR-malS的重组质粒pMAL-s的酶活性明显降低。而在葡萄糖作为碳源时,两种质粒酶活性无明显差异。 研究进展: 1.正在进一步分析酶活性实验结果,探究malS-5'UTR是否对malS基因调控具有重要作用。 2.同时正在进一步考虑对其他代谢基因的5'UTR及其他有代谢功能的基因进行进一步研究,以寻找新的调控途径。 下一步计划: 1.对当前的酶活性实验数据进行统计学分析。 2.进一步探究malS-5'UTR对malS基因的调控作用,并进一步核实其功能作用。 3.扩展研究范畴,探索其他代谢基因的5'UTR及其他有代谢功能的基因的调控机制。 4.通过多种手段对研究结果进行验证和论证。