单核细胞增生李斯特菌hfq基因缺失株的构建及其生物学特性.pdf

ＲesearchPaper研究报告

微生物学报ActaMicrobiologicaSinica
55(4):433－439;4April2015
ISSN0001－6209;CN11－1995/Q
http://journals．im．ac．cn/actamicrocn
doi:10.13343/j．cnki．wsxb．20140342

单核细胞增生李斯特菌hfq基因缺失株的构建及其生物学特性
康美琴，蔡雪薛，谈卫军，段斐斐，赵丹，潘志明，殷月兰*，焦新安
扬州大学，江苏省人兽共患病重点实验室，江苏省动物主要疫病防控协同创新中心，江苏扬州225009

摘要:【目的】单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes，Lm)为革兰氏阳性的短杆菌，营腐生和寄生生
活，是重要的食源性人兽共患病原菌，对低温、酸碱和高渗透压等环境具有较强的抵抗力。Lm在各种环境中
适应、生存并表现致病力，是与调控因子的网络调控密切相关，本文初步研究了细菌调控因子hfq的生物学
特性。【方法】利用同源重组技术对血清型为1/2a的EGDe菌株进行hfq基因的敲除，对获得的突变株
EGDe△hfq进行生化鉴定及生物学特性研究。【结果】实验结果表明:在4℃低温环境下，缺失株生长显著减
慢(P＜0.05);在含7%NaCl高渗BHI培养基及含4.5%乙醇的BHI培养基中生长受到抑制;缺失株形成生
物被膜的能力显著下降(P＜0.05);对Caco-2细胞系的侵袭能力下降;与野生型菌株相比，EGDe△hfq对
BALB/c小鼠的感染能力减弱、半数致死剂量提高。【结论】由此表明，Hfq蛋白对细菌抗胁迫、生物被膜形
成及细菌毒力具有重要的调控作用。此缺失株的构建为进一步研究Hfq的功能提供了材料，为研究其在Lm
胁迫环境生存及疾病预防控制奠定了基础。
关键词:单核细胞增生性李斯特菌，hfq基因，调控因子，致病性，胁迫应答
中图分类号:Q933文章编号:0001-6209(2015)04-0433-07

单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes，白，首次从金黄色葡萄球菌中发现，其结构和细菌
Lm)是一种重要的食源性病原菌，作为一种兼性胞Sm蛋白相似，通过形成同源六聚体与sＲNAs、DNA
内寄生菌，可在巨噬细胞和非吞噬细胞(如上皮细或ＲNA的结合，调控细菌基因的转录和翻译，有利
胞、内皮细胞和肝细胞)内增殖，可引起哺乳动物和于细菌对生存环境的适应，以及对致病性方面有所
［］
人的败血症、脑膜炎，以及孕畜流产等1－3。Lm所影响［5］。在不同细菌中Hfq的大小和功能有所不
引起的李斯特菌病，对畜牧业造成经济损失，对人类同，如大肠杆菌中Hfq是核糖核酸调节的关键调节
健康造成严重威胁。早在20世纪90年代，WHO将子，hfq缺失株在高温、氧化、酸、渗透压等条件下生
该菌列为食品中的四大致病菌之一，引起各国的普存、繁殖能力减弱［6－7］。另外，布鲁氏菌hfq缺失株
［］
遍关注4。Lm的致病性与毒力与相关调控因子的在营养匮乏、氧化、酸等不良环境中生存、繁殖能力
表达有着直接关系，深入研究其分子致病机理，对于丧失［8］。Hfq是李斯特菌重要毒力调节因子，由hfq
李斯特菌病的预防和控制显得尤为必要。基因编码，可与反式编码的sＲNAs互作调控基因的
Hfq也称HostfactorI(HF-I)，是一种热稳定蛋转译［5］，该因子与李斯特菌毒力基因及其它潜在基

基金项目:国家自然科学基金(31101841，31472193);江苏省科技支撑计划(BE2012367)
*通信作者。Tel:[phone];Fax:[phone];E-mail:[e-mail]
作者简介:康美琴(－)，女，河北人，硕士研究生，从事人兽共患病原菌的分子致病机理相关研究。
收稿日期:2014-07-03;修回日期:2014-11-03
434MeiqinKangetal．/ActaMicrobiologicaSinica(2015)55(4)

因的表达有关，从而对李斯特菌的侵袭起到调控作HeartInfusion)购自BD公司。
用。本研究通过同源重组的方法从基因组中缺失1.1.4主要试剂和仪器:细菌基因组DNA抽提纯化
hfq基因，并对缺失株的生物学特性进行了研究。试剂盒购自上海华舜生物工程有限公司;DNA聚合
酶、高保真DNA聚合酶、DNA回收试剂盒及限制性核
1材料和方法酸内切酶(BamHⅠ、XbalⅠ)、DNA分子标准量Marker
均购自大连宝生物(TaKaＲa)公司;T4DNA连接酶购
1.1材料自Promega公司;氨苄青霉素、氯霉素、红霉素等购自
1.1.1菌株和质粒:大肠杆菌(Escheri