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小菜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ基因的克隆及原核表达的综述报告 数 概述: 小菜蛾,作为重要的农业害虫,其大规模繁殖与频繁寄主间转换具有较强的能力,给农作物带来了巨大的危害。研究小菜蛾信息素在蛋白基因水平的表达,有助于开发具有高效、无公害的防治策略。针对小菜蛾的研究,本文通过文献资料的搜集和分析,梳理和总结了小菜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ基因的克隆技术及原核表达研究进展。 一、小菜蛾普通气味结合蛋白Ⅰ基因的克隆 小菜蛾感受化学信息的嗅觉系统主要包括感觉神经元和气味受体,一般认为气味受体主要由普通气味结合蛋白Ⅰ(OBP1)来介导。OBP1是小菜蛾嗅觉系统中最为重要的一类蛋白,需要用具有高度特异性的方法快速而有效地确立其基因克隆。 近年来,随着分子生物学技术的不断发展,研究人员通过PCR克隆技术、RT-PCR技术、RACE技术、EST分析等方法快速而有效地克隆出了小菜蛾OBP1基因。其中,最为成熟的PCR技术非常方便,而且具有较高的克隆效率和准确性,加之PCR技术的广泛应用,因此目前主要采用PCR技术进行小菜蛾OBP1基因克隆。 二、小菜蛾OBP1基因的原核表达 为了明确小菜蛾OBP1基因的功能和结构,研究人员通过原核表达技术将其表达在大肠杆菌中,进行了大量的研究。在此基础上,对其在体外的性质和功能进行了分析。 采用大肠杆菌系统表达小菜蛾OBP1的系统模型是最简单和最常用的一种。同时借助于该技术,还可以对小菜蛾OBP1基因的序列和结构特征进行广泛而深入的研究。例如,关于OBP1基因的启动子序列、反义基因和启动子活性的研究表明该基因启动子序列具有较强的活性,并且翻译起始的ATG序列位于蛋白质N端。 研究人员还尝试对表达的OBP1进行纯化和结晶,以便进行晶体学研究。结果表明,表达的OBP1具有固定的结构,并具有两个分别嵌入分子内的荷尔蒙结合袋。其结构与已知的其他昆虫OBPs十分相近,但在荷尔蒙结合袋的表面上存在几个关键的位点差异,这可能贡献了小菜蛾对化学信息的高度特异性感知。 三、小结 在最近的研究中,小菜蛾OBP1基因的克隆和原核表达技术迅速取得了重要进展。通过PCR技术、RT-PCR技术、RACE技术和EST分析等方法,从小菜蛾中快速而有效地克隆出了OBP1基因。同时,通过原核表达技术在大肠杆菌中表达而得到的OBP1蛋白,对OBP1的晶体学结构、酸解性与温度等影响,以及蛋白质功能和小菜蛾嗅觉系统的机制提供了重要线索。 因此,随着技术的完善和研究的深入,小菜蛾OBP1基因的克隆和原核表达技术将进一步为小菜蛾的防治策略提供重要的理论和实践指导。