高效液相色谱法紫外电化学串联检测测定鸡肉中克伦特罗残留.pdf

第31卷分析化学(FENXIHUAXUE)来稿摘登第8期

2003年8月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1024

高效液相色谱法紫外电化学串联检测测定鸡肉中克伦特罗残留

苗虹王凌琰吴永宁3
(中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所,北京100050)

1引言
盐酸克伦特罗又称氨哮素,克喘素,用于治疗哮喘。它属于β2兴奋剂,有加速动物生长、改进脂肪型动物的肌肉与脂
肪的比例的作用,但在畜牧生产中没有被作为合法的生长促进剂批准。国内外相继发生多起因食用含克伦特罗残留的
动物性食品发生中毒的事件。我国己将其列为禁用的饲料药物添加剂,并规定不得检出。本文采用高效液相色谱紫外
电化学串联检测法测定鸡肉中克伦特罗残留,并进行不同的加标水平回收率实验,能够为监测提供较好的手段。
2实验部分
2.1仪器与试剂高效液相色谱仪(AsilentHPLC1100色谱系统,紫外检测器,1049A电化学检测器):BransoniB22200E超
声清洗器;XZ26A旋转蒸发器;XY24调速多用振荡器:LD522A离心机;100mL圆底磨口具塞离心管:Barnstead2D8612233纯
水器;针头微孔滤膜过滤器(有机相,0.45μm);奥立龙Model868酸度计:VORTEX22Genie涡流混合器;氮气浓缩器;DY892
1型电动玻璃匀浆器。盐酸克伦标准品(中国生物制品药品检定),准确称取适量用甲醇配制成标准储备液;异丙醇、乙

酸乙酯、乙醇为分析纯,甲醇为色谱纯:浓氨水;0.01mol/LHCl;0.1mol/LHClO4;1mol/LNaOH;NaCl;0.1mol/LNaH2PO4
缓冲溶液(PH=6.0);弱阳离子交换柱(SupelcleamLC2WCXSPETubes,3mL,Supelco公司):水为超纯水。

2.2色谱条件色谱柱:ShandonBDSC18柱(250×4.6mm、5μμ);流动相:0.01mol/LKCl溶液2甲醇(55∶45,V/V);流速:1

mL/min;进样量:20μL;柱温:25℃。紫外检测波长为244nm;电化学检测器为脉冲方式,P1=2.0V,P2=-2.0V,P=1.0V。
2.3样品提取取100g剪碎的鸡肉,用50mL0.01mol/LHCl匀浆。称取15.0g(相当于10g鸡肉)加入10mL0.01

mol/LHCl和2mL0.1mol/LHClO4混匀,在超声波水浴中超声20min后取出置于80℃水浴加热30min。然后以流水冷

却,4500r/min离心20min。倾出上清液,向沉淀中加入5mL0101mol/LHClO4洗涤沉淀,再离心,合并两次的上清液。用
1mol/L的NaOH调pH至915±0.1,若有沉淀产生,以4500r/min离心20min,倾出上清液于100mL玻璃离心管中。
2.4萃取分离向上清液中加NaCl使其饱和,再加25mL异丙醇2乙酸乙酯(40∶60),振荡萃取20min后放置10min,吸
取上层有机相至旋转蒸发瓶中。用15mL异丙醇2乙酸乙酯(40∶60)再萃取一次。若有乳化层,3000r/min离心5min,合
并有机相,于50℃水浴旋转蒸发至近干。

2.5弱阳离子交换柱分离富集依次用10mL乙醇、3mL水、3mL0.1mol/LNaH2PO4缓冲溶液、3mL水淋洗LC2WCX

柱进行活化。用3mL0.1mol/LNaH2PO4缓冲溶液分3次洗涤旋转蒸发瓶中的残渣,经针头式微孔滤膜过滤,转移至LC2
WCX柱上,弃去流出液;再依次用4mL水、4mL乙醇淋洗LC2WCX柱后,收集用6mL乙醇2氨水(98∶2)淋洗LC2WCX柱的
流出液,于50℃氮气浓缩至干,加入0.5mL流动相混匀后转移至进样瓶中,进行液相色谱分析。
3结果与讨论
3.1实验条件的选择(1)流动相的选择根据文献首先选择含1%甲酸的甲醇溶液21%甲酸水溶液(34∶66)为流动相,
色谱峰为倒峰而且不稳定。经多次实验确定流动相为0.01mol/LKCl溶液2甲醇(55∶45)能得到较好的峰形。(2)电化学
检测方式及峰电位的确定选择电化学方式为脉冲方式,以减少克伦特罗在电极表面的吸附。选择峰电位为1.0V。
3.2回归方程、线性范围和最小检出限以峰面积对克伦特罗浓度作图,其紫外(UV)回归方程为y=0104926X-
0100287,r=0.9999;电化学(ECD)y=014789X+21309,r=019966。克伦特罗在0.5～4ng范围内具有良好的线性关系,
信噪比为S/N=3的条件下,紫外和电化学检测器的检出限均为0.1ng。
3.3弱阳痴子交换柱(LC2WCX)的容量分别以10、20、25、30及40ns克伦特罗上LC2WCX柱,以