出口食品厂卫生细菌检验方法.doc

出口食品厂卫生细菌检验方法
工器具（包括工作台）细菌污染情况的检验
检验项目：A大肠菌群
1.培养基：去氧胆酸盐琼脂
2.检验方法
取样在100cm2或50cm2的工器具面积上（冬天取100cm2，夏天取50cm2），用消毒棉签沾无菌蒸馏水擦拭，然后放入无菌生理盐水中（100cm2的工器具面积放入100ml的生理盐水中，50cm2的工器具面积放入50ml的生理盐水中）充分振摇制成原液（1：1）
接种与培养
用无菌吸管分别吸上述原液1ML注入灭菌平皿中，做两个平皿，倒入冷至45℃左右的培养基约15ML，摇匀凝固后再上层倒入3-5ml培养基旋转平板，复盖于表面37℃培养18小时，控制菌落密度在每个平皿10个左右阳性率最正确，如果菌落密度大，可以将原液稀释10倍100倍
结果报告：
平板上出现的大肠菌群呈深红色，菌落直径大于0.5mm，周围可能有雾状胆盐沉淀，菌落形态有的边缘整齐，呈圆形，扁平，有的边缘不齐，表面凸起或呈波形，且为玫瑰红色，这是检验为阳性，每平方厘米大肠菌群=测的菌落数*稀释倍数，每1平方厘米大肠菌群不到一个的，可化为每平方米上的个数
（二）-操作者手的检验
方法同工器具的检验，用灭菌的棉签揩拭手掌面（手背面不取）将棉签放入已准备好的灭菌生理盐水中，振挡摇匀，吸入平皿中每皿1ml,作两个平皿，37培养18小时，取出计数，计算单位以一只手掌面的大肠菌群个数为报告结果。
B.金黄色葡萄球菌
1.培养基
（1）生理盐水（2）10Nacl肉汤（3）B-P培养基（4）兔血浆
2.检验方法：
（1）取样：在100cm2或50cm2的工器具面积上（冬天取100cm2，夏天取50cm2），用消毒棉签沾无菌蒸馏水擦拭，然后放入无菌生理盐水中（100cm2的工器具面积放入100ml的生理盐水中，50cm2的工器具面积放入50ml的生理盐水中充分振摇制成原液（1：1）
（2）接种与培养
将上述制成的原液取1ml放入灭菌平皿后，倾注15-20ml的BP培养基，36±1℃培养，46±2小时
或是吸取0.1ml，用L棒涂布于表面干燥的BP琼脂平板，36±1℃培养，46±2小时
从平板上至少挑取1个可疑的金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验
（3）报告结果
定性报告如BP琼脂平板的可疑菌落做血浆凝固酶实验为阳性，即报告100cm2或50cm2的工器具上金黄色葡萄球菌存在
C.细菌总数
1.培养基：平板计数琼脂
2.检验方法：
取样：同大肠菌群的取样方法
接种与培养：
用无菌吸管分别吸上述原液1ML注入灭菌平皿中，做两个平皿，倒入冷至45℃左右的培养基约15ML，摇匀凝固后，37℃培养18小时，控制菌落密度在每个平皿10-250个为好，如果菌落密度大，可以将原液稀释10倍100倍
报告结果
每平方厘米细菌总数=测的菌落数*稀释倍数，每1平方厘米细菌总数不到一个的，可化为每平方米上的个数，
空气中杂菌数的测定（沉降法）
培养基：普通营养琼脂
操作方法：将培养基冷至45℃，倾注入平皿，每皿约15ml，36±1℃培养24小时，检查有无杂菌生长，即无菌的平皿，在车间的前后，左右,中九个点各放置一个平皿，并打开盖暴露5分钟即放在36±1℃培养24小时，计算菌落数
计算：每立方米细菌数=50000N/AT
式中A-所用平皿面积cm2
T-平皿暴露于空气中的时间（分）
N-培养后，平皿上的菌落数
（三）包装物料细菌总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌的检验方法同上，但是其取样面积都是100cm2。
2005.4.20