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新型非融合可溶性原核表达载体的构建及应用的中期报告
本中期报告旨在介绍新型非融合可溶性原核表达载体的构建及应用情况。
一、研究背景及意义
原核表达系统是蛋白质表达和纯化的重要工具，由于其速度快、成本低、表达量高等优点，被广泛应用于生命科学研究和工业生产等领域。目前市场上的原核表达载体主要是融合标签表达载体，如GST、His、MBP等。但是这些融合标签对目标蛋白质的特性和功能可能产生不良影响，因此越来越多的研究者将目光投向了非融合标签表达载体。
二、研究内容及方法
本研究选用pET-28a(+)载体作为骨架，设计合成了一种新型非融合可溶性表达载体，命名为pET-SUMO。pET-SUMO采用SUMO蛋白质作为可溶性表达标签，使目标蛋白在表达过程中具有良好的溶解性和稳定性，同时可免疫检测SUMO标签。在构建载体过程中，采用PCR扩增、限制性酶切和连接酶切等技术，最终成功构建了目标载体。
利用pET-SUMO载体，我们对两种不同类型的蛋白质进行了表达，并进行了初步的纯化和鉴定。结果表明，pET-SUMO载体在表达过程中确实能够提高目标蛋白的溶解性和表达量，并且通过免疫印迹检测，发现SUMO标签在目标蛋白表达过程严格附着在目标蛋白上，而不是游离存在。
三、研究进展及展望
本研究初步构建了一种新型非融合可溶性原核表达载体pET-SUMO，并且进行了基础的应用验证。下一步，我们将进一步完善载体的构建和优化，并开展更加系统和深入的应用研究，以此进一步促进原核表达技术的发展与应用。