基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建.pdf

第36卷第9期中国预防兽医学报Vol.36，No.9
2014年9月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineSep.2014

doi:10.3969/j.issn.1008-0589.2014.09.06
基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因
新型原核温控表达载体的构建

田秋丰1,2*，于申业2*，衣菲1,2，倪宏波1，吕雪莲1,2，刘思国2*
(1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆163319；
2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨150001)

摘要：单核细胞增生李斯特菌的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白，具有在37℃条件下启动下游基因
表达的功能。为构建新型原核温控诱导表达载体，本研究利用PCR方法扩增prfA基因，并将其与绿色荧光蛋白
(GFP)或红色荧光蛋白(DsRed)基因分别插入到pET-28a和pUC19载体中，构建重组质粒pET-prfA-EGFP和
pUC-prfA-DsRed。将重组质粒转化大肠杆菌DH5α，在37℃条件下培养，利用激光共聚焦显微镜观测细菌中荧光
蛋白的表达情况。结果表明，构建的两种重组质粒的荧光蛋白基因于37℃条件下，在受体菌中均获得有效表达，
而30℃时则仅有微弱的本底荧光蛋白表达。本研究构建了以最适生理温度为单一诱导条件的温控表达的新型原
核细胞表达载体，为蛋白的表达与功能研究提供了新的平台。
关键词：单核细胞增生李斯特菌；prfA基因；温控表达；荧光蛋白
中图分类号：S852.61文献标识码：A文章编号：1008-0589(2014)09-0688-04

Theconstructionofanovelprokaryoticthermoregulatedexpression
vectorbasedonprfAgeneofListeriamonocytogenes

TIANQiu-feng1,2*,YUShen-ye2*,YIFei1,2,NIHong-bo1,LVXue-lian1,2,LIUSi-guo2*
(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity,Daqing163319,China;
2.DivisionofBacterialDiseases,StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology,HarbinVeterinaryResearchInstitute,
ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Harbin150001,China)

Abstract:TheprfAgeneencodingathermoregulatedpromoterproteinwhichhastheabilitytoinducetheexpressionof
downstreamgenesat37℃inListeriamonocytogenes.Toconstructanovelthermoregulatedprokaryoticexpressionvector,the
380bpfragmentofprfAgenewasamplifiedbyPCRandinsertedintopET-28aorpUC19vectorwithadownstreamreportgene
ofegfporDsRedtoconstructrecombinantplasmidsofpET-prfA-EGFPandpUC-prfA-DsRed,respectively.Therecombinant
plasmidwastransformedintoE.coliDH5αandtheresultsshowedthattheeGFPorDsRedwasefficientlyexpressedinE.coliat
37℃,while,whichwasbarelyexpressedat30℃.Thesedatademonstratedthattheexpressionofforeigngeneinthenovel
expressionvectorswasonlyinduceddependingonincubationtemperaturewhichprovidedanovelplatformforproteinexpression
andfunctionstudy.
Keywords:Listeriamonocytogenes;prfAgene;thermoregulatedexpression;fluorescentpro