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Waters色谱柱故障排查指南.pdf

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沃特世HPLC故障排查指南 目录 变化的保留时间...........................................................................................................................1 飘移的保留时间...........................................................................................................................2 峰拖尾的原因................................................................................................................................3 不同批次色谱柱之间的重现性..............................................................................................5 色谱柱寿命.....................................................................................................................................7 样品前处理的问题......................................................................................................................8 常见色谱问题及沃特世色谱柱产品解决方案..............................................................10 变化的保留时间：我没有认识到要得到重现性好的实验 Q结果竟然还要如此精确的控制流动相组 成，有没有其它需要注意的？ ：我的色谱峰保留时间不稳定，会是什 Q么问题？A：另一个重要因素是温度。如果所有色谱峰的保留时间 都朝同一个方向漂移，那么你可以怀疑是温度原因所致。 A：首先需要找出变化的模式，它会告诉我们很多潜在的 根据经验，每℃的变化导致保留时间变化大约1%到2%左 原因。如果保留时间从这次进样到下次进样随机变化，我 右。在通常情况下没有什么问题，但是在许多地方空调和 会首先检查泵和溶剂混合装置。为了校验泵是否工作正常， 暖气在周末的时候会关闭，然后你会疑惑为什么样品在周 可以用量筒和秒表来测量流速。为了校验流动相组成没有 变化，可以在流动相中加入跟踪剂来观察基线的变化。如末的保留时间会和平时不一样。使用柱温箱可以很好的避 果流动相组成是稳定的，基线也该很稳定。如果流动相组免这个问题。 成有变化，你会观察到基线的相应变化。举例说明，如果在反相色谱中，如果分析离子或离子化的样品，保留 你使用反相条件，检测器，可以在有机相溶剂中加入 UV0.1%时间会受到缓冲溶液的离子强度的影响，但是影响会 的丙酮，监测254nm下的基线变化。另一种方法也可以， 很小，通常可以忽略不计。典型的状况是缓冲液的摩 你需要人工配制流动相，然后通过溶剂混合装置。如果保 尔数改变20%，保留时间变化约1%。由于缓冲液组 留时间的变化消失了，问题就出在溶剂混合装置上。 分通常是称量的，那么大的误差是不会发生的。 ：一天之内的进样保留时间一致，但是 ：有没一些特殊的情况需要考虑一些其 不同天数之间的保留时间会变化。 QQ它的参数？ A：这种情况下，仪器本身不太可能有问题。保留时间变 A：是的，在离子对色谱中，离子对试剂的浓度会影响离 化最有可能的原因是流动相组成的变化。在反相色谱中， 子化样品的保留。与离子对试剂电荷相反的分析物保留时 保留因子k和流动相中有机溶剂的体积含量成指数关系。 间会增加，相同电荷的保留时间减少，中性化合物基本不 根据经验，如果有机溶剂含量误差1%，那么保留时间的变 化在5%到15%之间，典型情况在10%左右。这意味着你受影响。在低浓度下，例如小于5mM/L，样品组分保留时 必须仔细称量有机溶剂，最好的配制流动相方法是用质量间的变化受与离子对试剂浓度影响，与离子对试剂的浓度 称量代替体积称量。成正比。在高浓度离子对试剂下，例如10mM/L左右，填 料表面被离子对试剂饱和，那么试剂浓度的改变不会对样 此外，流动相如何脱气也可能导致保留时间的变化。 品保留时间有明显的影响。这是在方法开发时需要考